在线客服
热线电话

微信公众号

企业微信
我的购物车 0

文章中心

细胞课堂|巨噬细胞的培养方法

BIOESN

细胞·简介



▶单核细胞及由单核细胞演变而来的具有吞噬功能的巨噬细胞,称为单核吞噬细胞系统。单核细胞发生于骨髓的多能干细胞,循环于血液中,穿透血管内皮进入组织内,转变为巨噬细胞。单核吞噬细胞系统在体内分布广,细胞数量多,主要分布于疏松结缔组织、肝、脾、淋巴结、骨髓、脑、肺以及腹膜等处,并依其所在组织的不同而有不同的名称。

▶单核吞噬细胞系统的细胞有很强的吞噬能力医学|教育网整理,能吞噬异物、细菌、衰老和突变的细胞等。此外,也吞噬抗原抗体复合物,并参与脂质与胆固醇代谢,可吞噬和蓄积脂质。吞噬的生理意义在于消除体内不需要的物质,其中巨噬细胞与淋巴细胞、粒细胞、肥大细胞,在功能上,有互相促进和互相抑制的作用。当单核吞噬细胞系的生理功能失调时,可引起多种疾病。

▶巨噬细胞(英语:Macrophages,缩写为mø)是一种位于组织内的白血球,源自单核细胞,而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞,在脊椎动物体内参与非特异性防卫(先天性免疫)和特异性防卫(细胞免疫)。它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用(即吞噬以及消化),并激活淋巴球或其他免疫细胞,令其对病原体作出反应。巨噬细胞属免疫细胞,有多种功能,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得,便于培养,并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群,在条件适宜下可生活2-3周,多用做原代培养,难以长期生存。

名称

J7 74小鼠巨噬细胞

形态不规则形
传代方法1:2传代,2~3天换液
营养体系DMEM高糖培养基+10%FBS+1%双抗


BIOESN

细胞的主要特点


科学家以基因改造的方式,让老鼠的转型生长因子β,无法对在外周循环中的巨噬细胞发出讯号。科学家发现,如此做后,外周循环的巨噬细胞会大举进入老年失智症老鼠的大脑中。

康乃狄克州耶鲁大学医学院陶恩说,外周循环巨噬细胞渗透大脑的动作,即是老年失智症老鼠的疗方。这项结果大出陶恩意料。之前科学家的论点是,提高大脑的免疫反应可能加重发炎,因而对病情有害。实验中,基改老鼠的脑斑有九成消失无踪,而且老鼠的官能反应也获得改善,例如走迷宫不再那么容易迷失方向。陶恩说,若科学家能以药物,封阻人体外周循环中的转型生长因子β,应该也能达到动员外周巨噬细胞进入大脑,清除老人斑的目的。陶恩的研究团队已将研究重心,改为寻找可封阻转型生长因子β 的药物。


BIOESN

培养方法


巨噬细胞也建有无限细胞系,大多来自小鼠,如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等,均获恶性,培养中呈巨噬细胞形态和吞噬功能,易于传代和瓶壁分离,但难以建株。培养巨噬细胞可用各样方法和各种来源来获取细胞,以小鼠腹腔取材法最为实用,其法如下:

1、实验前三天,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml(勿注入肠内)。

2、引颈杀死动物,手提鼠尾将全鼠浸入70%酒精中3~5秒。

3、置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁。

4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中,同时从两侧用手指揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动。

5、用针头轻轻挑起腹壁,使动物体微倾向一侧,使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。

6、小心拔出针头,把液体注入离心管中,250g4℃离心10分钟,去上清,加10mlEagle培养基。

7、计数细胞,每只小鼠可产生20~30×105细胞,其中90%为巨噬细胞。

8、为获取3×105帖附细胞/平方厘米,需接种2.5×106/ml。

9、为纯化培养细胞,去除其它白细胞,接种数小时后,去除培养液,用Eagle液冲洗1~2次后,再加新Eagle培养液置37℃CO2温箱中培养。

BIOESN

巨噬细胞产生的细胞因子有那些?


巨噬细胞是一种位于组织内的白血球。它能吞噬和消化病原体以及组织崩解产物,这个过程称吞噬作用。它们通常存在于所有的组织中,其主要功能是清除所有死亡的细胞和组织。此外,巨噬细胞有迅速分泌多种炎症介质,影响炎症反应的发展。巨噬细胞因子是指巨噬细胞产生的一系列细胞因子,包括促炎细胞因子、抗炎细胞因子和趋化因子。
促炎细胞因子

当巨噬细胞受到炎症刺激时,它们会分泌细胞因子,如肿瘤坏死因子(TNF)、IL-1IL-6IL-8和IL-12。虽然单核细胞和巨噬细胞是这些细胞因子的主要来源,但它们也由活化的淋巴细胞、内皮细胞和成纤维细胞产生。此外,巨噬细胞还会释放趋化因子、白三烯和前列腺素。所有这些分子都可能诱导血管通透性增加和炎症细胞的招募。除了局部效应外,这些介质还产生全身效应,如发热和产生急性炎症反应蛋白。
抗炎细胞因子

炎症受到多种抑制剂和拮抗剂的严格调控。巨噬细胞释放的抗炎细胞因子主要包括IL-10和TGF-β。

IL-10是一种35kD的细胞因子,由活化的巨噬细胞、B细胞和T细胞产生。它的主要作用是抑制巨噬细胞活化,以及TNF、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-12和GM-CSF的产生。IL-10可抑制活化巨噬细胞MHC-II表达,因此是抗原呈递的强效抑制剂。巨噬细胞本身也受到IL-10的影响,当巨噬细胞暴露于IL-10这种细胞因子会降低它们的杀微生物活性,并降低它们对IFN-γ的反应能力。

TGF-β与IL-10一起,是另一种强大的抗炎细胞因子,作用于许多靶细胞,并能调和TNF、IL-1β和IL-12等炎症作用。TGF-β是Th1和Th2细胞的强效抑制因子,但却能促进Tregs的功能。TGF-β还与造血有关,在胚胎发生、组织再生、细胞增殖和分化中具有重要作用。
趋化因子

趋化因子是一种特殊的肝素结合细胞因子家族,能够在趋化作用的过程中引导细胞迁移。趋化因子在控制免疫细胞趋化方面起着至关重要的作用。此外,一些趋化因子在发育过程中发挥作用,促进血管生成,或引导细胞到组织中,为细胞的分化提供关键信号。巨噬细胞释放的趋化因子主要包括CXCL1、CXCL2CCL5、CXCL8(IL-8)、CXCL9、CXCL10和CXCL11。


BIOESN

热灭活的血清适合培养巨噬细胞?


上一篇:技术文章|标签蛋白纯化之His标签 下一篇:细胞培养|细胞冻存注意事项