一氧化氮NO检测试剂盒

产品描述：

一氧化氮(Nitric oxide，NO)是一种重要的气体信号分子和效应分子，可以作为第二信使参与许多生物效应和生理病理过程。体内 NO 含量低，半衰期短，且易被氧化。Griess 反应一直是最经典的生物样品 NO 测定方法，反应产物的光密度 OD 值与 NO 浓度呈线性关系。本试剂盒基于 Griess 反应原理，采用优化的反应条件和比色法测量液体样品NO 的浓度。方法简单，线性范围 2.5~800µM。按照每 150 µl 反应体系含 50 µl 样品推算，相当于样品的检测灵敏度约为 300 pmol/50 µl。

组成与储存 ：(500 次)

1. NaNO2 标准品 0.5 ml (100 mmol/L) 

2. Griess R1 25 ml 

3. Griess R2 25 ml

4ºC 避光保存 6 个月有效

所需仪器：

96 孔酶标板，可见光分光光度计，最佳波长 540nm，也可选用 490-550 nm 进行测定，但灵敏度略降。

样品测量：

1. 取 50 µl 标准品或样品，加入 96 孔板中。

2. 每孔加入 50 µl Griess R1

3. 优化步骤：室温避光放置 5 分钟。此步骤可进一步提高灵敏度。但 NO 浓度较高时可省略。

4. 每孔加入 50 µl Griess R2。

5. 室温避光放置 5 分钟。

6. 540 nm (490-550 nm 均可)测定吸光度。应在 30min 内测完，以免退色降低灵敏度。

7. 制备标准曲线：以吸光度 OD 值为 x 轴，标准品浓度为 y 轴，用 Excel 做图并得到标准曲线公式。

8. 将样品 OD 值代入公式计算 NO 浓度。

准备步骤：

测定前取出试剂升温到室温。标准品稀释：每次测量均新做标准曲线，用与样品相似的液体稀释标准品。

A. 取 100 mmol/L NaNO2 标准品 8µl，加到 992µl蒸馏水中，得到 1000µl 之 800 µM 管。

B. 从800 µM管取200µl加入200µl蒸馏水得400µM管，然后依次取样用蒸馏水倍比稀释，得到200、100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.57 μM管。最后设置不加标准品的0浓度管。

C. 从以上各管各取50 µl 加入酶标板。

D. 等待后续加入样品，以及加入 Griess 试剂后，

说明 ：

1. 在 30 min 内测完，以免退色而降低灵敏度。 

2. 快速测定：如果样品 NO 浓度较高，则可将 GriessR1 和 R2 预先 1:1 等体积混合后，各取 100 µl混合试剂与 50 µl 样品反应测定。 

3. 样品所赖以存在的液体的内在成分会干扰测定，降低 OD 值和灵敏度。干扰程度：尿液>血清>血浆>培养基>蒸馏水。 

4. 每次测量必须新做标准曲线，尽量用与样品相同的液体稀释标准品。 

5. 细胞培养基中酚红的红色颜色不影响测定。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！