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RIPA裂解液(带PMSF) BES20007LS

RIPA Lysis Buffer+PMSF

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RIPA裂解液(带PMSF)  

产品描述:

RIPA裂解液对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分有较强裂解作用,是常用的细胞组织快速裂解液。使用RIPA 裂解液加强型特别适于western blot和大多数蛋白-蛋白相互作用的实验等。PMSF能抑制蛋白酶对蛋白的降解。


储存:

RIPA裂解液 100ml 4 ℃保存

PMSF粉末 (100mM) -20℃保存

PMSF溶剂 1ml  -20℃保存

以上组分12个月有效


制备细胞裂解产物(预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀,按1:99比例加入RIPA裂解液中)

1.800g4℃离心5分钟收集培养细胞,估计细胞离心后的体积(PCV,106cells=~20ml, 107cells =~100mlPCV);

2.每50-100ml PCV加入5倍体积RIPA裂解缓冲液(250-500ml),冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;

3.12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物;

4.假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得细胞总蛋白产物。


制备组织裂解产物(预先将PMSF溶剂加入PMSF粉末中混匀,按1:99比例加入RIPA裂解液中)

1.取50-100mg组织在冰上剪成碎片,用预冷的PBS洗涤2次离心弃去PBS;

2.加入0.5-1ml预冷RIPA裂解缓冲液;

3.4℃用玻璃匀浆器匀浆20-40次,直到95%的细胞被破碎,然后在冰浴中放置10分钟,并每隔5分钟在漩涡混合仪上振荡30秒;

4.12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;

5.假如所得蛋白产物较为粘稠,95℃加热5分钟,然后迅速冰浴5分钟,12000g4℃离心10分钟,将上清转移到新的离心管中,即得组织总蛋白产物;

6.20%的甘油保存于-70oC 或-20oC。


注意:

1.在转移上清液时不要吸入底部的沉淀物;

2.在做免疫沉淀或免疫共沉淀时最好在实验前进行蛋白的提取,以避免某些不稳定蛋白的降解;

3.PMSF溶液易降解,请于-20oC保存,按比例现用现加。

注意事项:该产品仅供科研实验使用,未经允许不得用于其它用途!

因厂家更改商品包装、场地、附配件等不做提前通知,且每位咨询者购买、提问时间等不同。为此,客服给到的回复仅对提问者3天内有效,其他网友仅供参考!给您带来的不便还请谅解,谢谢!

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