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BCA蛋白法含量测试盒 BES-BK2238B

BCA蛋白法含量测试盒

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BCA蛋白法含量测试盒

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理

碱性条件下,蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键,能将 Cu2+还原成 Cu+;2 分子的 BCA 与 Cu+结合,生成紫色络合物,在 540-595nm 有吸收峰,562nm 处吸收峰最强。

自备仪器和用品

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂 A:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂 B:液体 1mL×1 支,4℃保存。

标准蛋白:液体 2 mL×1 支,4℃保存。

工作液配制:临用前请根据拟用工作液体积(样本数×1 mL),将试剂 A 和 B 按照 50:1的比例混合,盖紧后充分混匀。

样品中可溶性蛋白质提取

1. 液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。

2. 组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g组织,加入 1mL 提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即待测液。

3. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

测定操作

1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 562 nm,蒸馏水调零。

2. 工作液置于 60℃水浴预热 30 min。

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注意:空白管和标准管只需要做一次。

计算公式

Cpr (mg/mL) = C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) = 0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)

Cpr (mg/g)= C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷ W = 0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷ WW: 样本质量,g

注意事项

BCA 法蛋白含量测定试剂盒,适用于测定蛋白浓度在 20-5000μg/ml 样品。测定前取 1-2 个样做预实验,若 A 测定管-A 空白管﹥1.5,需将样本用提取液稀释后再测定,以确保测定的准确性。


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