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考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒 BES-BK2234B

考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒

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考马斯亮蓝法蛋白含量测试盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理:

在酸性溶液中,考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合形成蓝色复合物;该复合物在 620nm 处有最大吸收峰, 其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高,适合微量蛋白质分析。

自备仪器和用品:

离心机、酶标仪、96 孔板、移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体 11 mL×1 瓶,4℃保存。

样品中可溶性蛋白质提取:

1. 液体样品:澄清液体样品可以直接测定。

2. 组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:20 的比例(建议称取约 0.05 g 组织,加入 1mL 提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水))冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即待测液。(动物样品常常需要稀释)

3. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。 

测定操作:

1. 酶标仪预热 30 min。

2. 在 96 孔板中加入:

image

注意:

1、 空白管只需要测定一次。

2、 测定管若出现浑浊或分层现象,说明蛋白含量较高,须将待测液用提取液稀释 10~20 倍后重新检测。

计算公式:

标准曲线:y = 7.1265x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白标准品浓度(mg/mL)

 y: 吸光值差值

1.按液体样本体积计算:Cpr(mg/mL)=(△A+0.0007)÷7.1265 =0.1403×(△A+0.0007)

2.按组织样本质量计算: Cpr(mg/g 鲜重)=(△A+0.0007)÷7.1265×V 总÷W=0.1403×(△A+0.0007)÷WV 总:提取液体积,1 mL; W:样本质量,g。


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