外泌体提取试剂盒(血清或血浆)
保存与应用
【保存条件】
本试剂盒室温下运输,室温或 2-8℃下保存 12 个月(按照试剂盒不同成分分别 保存),使用前请充分混匀。
【应用范围】
本产品只用于科学研究,不能用于临床诊断。 本试剂盒提取的外泌体可用于 NTA 粒径分析,Western Blot,核酸提取及其 后续分析(Q-PCR,测序等),不建议用于外泌体标记和蛋白质质谱分析等。
产品介绍
外泌体(Exosome)是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡 (Extrocellular Visicles,EVs)。外泌体普遍存在于多种体液中,其内容物丰富, 包括蛋白质、脂质和核酸等,在细胞间信息交流中发挥着重要作用,主要参与免 疫抗原呈递,神经递质传递,脂类代谢及细胞信号转导等过程,并与多种疾病的 发生、发展、治疗及预后密切相关。
密度超速离心作为传统并有效的外泌体分离方法,但其复杂的操作流程,昂 贵的仪器设备,限制了外泌体的常规研究。本公司研制一种外泌体提取试剂,通 过优化多聚物混合物与样品混合,经离心可将外泌体沉淀富集,其操作简单,用 时短,结果稳定,污染蛋白含量较少,只需普通离心机就可以分离得到较纯的完 整外泌体。
试剂盒组成和说明
本试剂盒只适用于血清或血浆的外泌体提取。
本试剂盒每个反应是基于 250μl 血清或血浆作为外泌体提取样品,可依据外泌体 用量做成比例放大,建议最小样品起始用量为 100μl,具体见下表。
操作方法
图 1 简单操作流程图
1. 样本预处理
对于冻存样品,室温或 25℃水浴解冻,将完全融化的样品置于冰上;对于 新鲜样品,收集样品后置于冰上,3,000×g,4℃离心 15min,去除细胞或细胞碎 片,离心后将上清吸入新管中。
2. 沉淀外泌体
吸取 250μl(至少 100μl )处理后的血清或血浆放入 1.5mL 离心管(试剂盒 不提供),加入等体积(250μl)的样品稀释液,混匀,然后加入 125μl 外泌体提 取试剂,颠倒充分混匀后 4℃静置至少 30min。静置后的样品 1,500×g,4℃离心 30min,管底可见白色沉淀,吸去上清,1,500×g,4℃离心 5min,完全去除残留 液体,注意不要破坏外泌体沉淀。
3. 外泌体重悬
加入 100ul 样品稀释液,或下游应用所需的相应缓冲液,用移液器反复吹打 或漩涡混合均匀,彻底溶解沉淀,此重悬液中含有提取的完整外泌体。
4. 外泌体纯化
将重悬的外泌体转移至纯化柱,放入 1.5ml 收集管(试剂盒提供,事先已放 好)中,2,000×g,4℃离心 5min,弃掉纯化柱,收集管中为提取的外泌体。提 取的外泌体可直接应用于下游实验(如,粒径分析、核酸提取等),或者储存在 2-8℃保存一周,或者-80℃保存大约三个月。
用途:该产品仅供科研实验使用,未经允许不得用于其它用途!以实际收货产品说明书为准,网站说明书仅供参考。