外泌体提取和纯化试剂盒（血清或血浆）

保存与应用

【保存条件】

本试剂盒 2-8℃下运输，室温或 2-8℃下保存至少六个月，使用前需充分混匀。 

【应用范围】 

本产品只用于科学研究，不能用于临床诊断。 本试剂盒提取的外泌体除了可用于粒径分析，Western Blot，ELISA，核酸提取及 其后续分析（Q-PCR，测序等）外，也可用于蛋白质质谱和外泌体标记等。

产品介绍 

外泌体(Exosome)是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡 (Extracellular Vesicles，EVs）。外泌体普遍存在于多种体液中，其内容物丰富， 包括蛋白质、脂质和核酸等，在细胞间信息交流中发挥着重要作用，主要参与免 疫抗原呈递，神经递质传递，脂类代谢及细胞信号转导等过程，并与多种疾病的 发生、发展、治疗及预后密切相关。 差速超速离心作为传统并有效的外泌体分离方法，但其复杂的操作流程，昂 贵的仪器设备，限制了外泌体的常规研究。通过多聚物沉淀外泌体，具有简单、 快速、可大体积操作和成本较低优点外，其分离的外泌体含有较多污染蛋白，限 制了下游部分应用。能够高纯度地提取和纯化生物样本（血清、血浆或尿液等） 和细胞培养上清中外泌体，目前有效的方法是通过抗体偶联磁珠亲和捕获，但是 其成本较高，且不易捕获总外泌体，也限制了外泌体的常规研究，尤其是临床样 本外泌体的研究。 

研发出一种具有自主知识产权的提取和纯化生物样本和细胞培养 上清中外泌体的方法，即外泌体提取和纯化试剂盒，能够简单、快速地捕获生物 样本（血清、血浆或尿液等）和细胞培养上清中外泌体，尤其是血清或血浆样本。 其主要原理是依据外泌体的膜结构特点（脂质双分子层），设计和修饰特异结合 外泌体的树脂，通过与外泌体脂质双分子层组成成分结合，而几乎不与样本中其 它蛋白质结合来实现外泌体的提取和纯化，得到较纯的完整外泌体。这种方法简 单，易于操作，适合常规外泌体实验要求，有广泛的下游应用，如粒径分析，核 酸提取，Western Blot，ELISA，蛋白质质谱和外泌体标记等。 

试剂盒组成和说明 

本试剂盒只适用于血清或血浆的外泌体提取和纯化。 本试剂盒每个反应是基于 1.0ml 血清或血浆作为起始体积，样本不足时，需要 用无核酸酶水补充至 1.0ml ，但样本量不要低于 500μl。

试剂盒在使用前需恢复到室温。

操作方法 

1. 样本预处理 对于冻存血清或血浆，室温或 25℃水浴解冻，将完全融化的样品置于冰上； 对于新鲜血清或血浆，收集样品后置于冰上，12,000×g，离心 15min，去除细胞 或细胞碎片，离心后将上清吸入新管中。

2. 纯化柱平衡 吸取 2.0ml 平衡缓冲液加入纯化柱中（已放入收集管中），500×g 离心 2min， 弃去滤液，纯化柱重新放入收集管中，待用。

3. 外泌体结合 吸取 1.0ml 处理的血清或血浆放入 15ml 离心管中（试剂盒不提供），加入 结合缓冲液 3.0ml，颠倒混匀后静置 2min，然后将混合液分 2 次（每次大约 2.0ml） 加入纯化柱中（已放入收集管中），500×g 离心 2min，每次倒掉滤液，将纯化柱 再次放入收集管中。

4. 外泌体洗涤 吸取 1.0ml 洗涤缓冲液加入纯化柱中（已放入收集管中），500×g 离心 2min， 然后 1,500×g 离心 2min，弃去滤液和收集管。

5. 外泌体洗脱 将纯化柱放入新的 15ml 离心管中（试剂盒不提供），加入 400μl 洗脱液于纯 化柱中，室温静置 5min，500×g 离心 2min，将离心得到的溶液再加入纯化柱中， 500×g 离心 2min，弃掉纯化柱，最后离心管中液体为提取的外泌体，可直接应 用于下游实验（如，外泌体鉴定、核酸提取、蛋白质质谱和外泌体标记等），或 者储存在 2-8℃保存一周，或者-20℃或-80℃保存大约三个月。

注意事项 1. 离心均在室温下进行。 2. 转移混合液至纯化柱时要缓慢加入，不要溢出。

用途：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。