外泌体浓缩试剂盒（细胞培养上清或尿液）

保存与应用 

【保存条件】 

本试剂盒低温下运输，2-8℃下可保存 12 个月，使用前各试剂需充分混匀。

【应用范围】

本产品只用于科学研究，不能用于临床诊断。 

本产品适用于细胞培养上清、尿液、唾液或牛奶中外泌体的浓缩，一般可浓缩 20-40 倍，接下来，可直接应用于核酸提取，ELISA 或 Western Blot 和荧光标记 等。

产品介绍

外泌体(Exosome)是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡 (Extrocellular Visicles，EVs）。外泌体普遍存在于多种体液中，其内容物丰 富，包括蛋白质、脂质和核酸等，在细胞间信息交流中发挥着重要作用，主要参 与免疫抗原呈递，神经递质传递，脂类代谢及细胞信号转导等过程，并与多种疾 病的发生、发展、治疗及预后密切相关。

密度超速离心作为传统并有效的外泌体分离方法，因其复杂的操作流程和昂 贵的仪器设备，限制了外泌体的常规研究。通过多聚物沉淀细胞培养液中的外泌 体，一般均需要较高转速离心才能将外泌体沉降下来，限制了大体积样本中外泌 体的沉淀或富集。研制的外泌体浓缩试剂盒是利用专门设计和表面修饰 的树脂来捕获（浓缩）样本中外泌体的，根据外泌体的结构特点，树脂可快速而 有效地与外泌体结合，进而分离（浓缩）样本中外泌体，应用洗脱液可洗脱得到 完整的具有生物学功能的外泌体，同时可去除细胞培养上清或尿液样本中小分子 和离子。

此试剂盒有不同规格的浓缩柱，一次可处理 5ml、10ml 或 40ml 样本，可达 到 20-40 倍的外泌体浓缩。此种方法操作简单，适合常规实验室的外泌体研究， 有广泛的下游应用，如浓缩后可直接做：粒径分析，核酸提取，Western Blot， ELISA 和荧光标记等，也可以进一步对外泌体纯化，如“SuperEV 超纯尺寸排阻 色谱柱”“外泌体纯化试剂盒”等。

试剂盒组成和说明

注：各试剂使用前请颠倒混合均匀，尤其是结合树脂彻底混匀后快速吸取。

操作方法 

1. 样本预处理

对于冻存的细胞培养上清或尿液，室温或 25℃水浴解冻，将完全融化的样 品置于冰上；对于新鲜的细胞培养上清或尿液，收集样品后置于冰上，3,000×g， 4℃离心 10min，去除细胞或细胞碎片，离心后将样本吸入新管中备用。

对于冻存的唾液，室温或 25℃水浴解冻，将完全融化的样本置于冰上；对 于新鲜的唾液，收集样本后置于冰上，将唾液与去离子水按照 1：4 的比例稀释， 3,000×g，4℃离心 10min，去除细胞或细胞碎片，离心后将样本吸入新管中备用。 对于冻存的牛奶，室温或 25℃水浴解冻，将完全融化的样本置于冰上；

对于新鲜的牛奶，收集样本后置于冰上，3,000×g，4℃离心 10min，取中间液体组 分与去离子水按照 1：4 的比例稀释，3,000×g，4℃离心 10min，离心后将样本 吸入新管中备用。

2. 外泌体结合

吸取 5ml 上述处理的细胞培养上清于 15ml 离心管中（试剂盒不提供），加入 0.5ml 的结合缓冲液，盖紧盖子，颠倒混匀。

3. 外泌体浓缩

吸取 200μl 结合树脂（吸取前彻底混匀结合树脂，快速吸取）加入步骤 2 的15ml 离心管中，盖紧盖子，室温颠倒混匀 15min 后，1,500×g 室温离心 2min。轻轻将离心管从离心机中取出，用移液器取 400μl 上清液（不要弃掉），小心倒掉剩余上清液，用移液器中的液体（400μl）轻轻吹起树脂，全部转移至纯化柱中（已放入收集管），静置 2min，2,000×g 室温离心 2min，弃去滤液，将纯化柱放回收集管中。

4. 外泌体洗涤

取 500μl 洗涤液加到纯化柱中（已放入收集管），静置 3min，3,000×g 室温离心 2min，弃去滤液。

5. 外泌体洗脱

将纯化柱转移至低吸附蛋白的 1.5ml 离心管中（试剂盒提供），加入 200μl 洗脱液，静置 5min，300×g 室温离心 2min，将滤液重新加入纯化柱，静置 2min， 最后 3000×g 离心 2min，离心管中所得液体即为浓缩后的外泌体溶液。 

提取的外泌体可直接应用于下游实验，或者 2-8℃保存一周，或者-20℃或 -80℃保存大约三个月。

用途：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。