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支链淀粉含量测试盒 BES-BK2382B

支链淀粉含量测试盒

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支链淀粉含量测试盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

支链淀粉是具有高度分支的多糖,淀粉中直链淀粉和支链淀粉的比例和含量对淀粉产品的加工、物化特性、糊化温度等有着直接的影响,对于不同比例直、支链淀粉的淀粉的研究具有重要的意义。

测定原理:

利用 80%乙醇可以把样品中可溶性糖与淀粉分开,利用双波长比色法测定支链淀粉含量。

需自备的仪器和用品:

酶标仪/可见分光光度计、水浴锅、可调式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研钵、冰、乙醚和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 100mL×1 瓶;4℃保存;

试剂二:乙醚 100mL×1 瓶;4℃保存;(自备)

试剂三:液体 100mL×1 瓶;4℃保存;

试剂四:液体 2mL×1 瓶; 4℃保存;

试剂五:液体 300uL×1 瓶; 4℃保存;

淀粉提取:

称取 0.01~0.02g 烘干样本(建议称取约 0.01g)于研钵中研碎,加入 1mL 试剂一,充分匀浆后转移到 EP 管中,80℃水浴提取 30min,3000g,25℃离心 5min,弃上清,留沉淀,加入1mL 试剂二(乙醚)振荡 5min,3000g,25℃离心 5min,弃上清,留沉淀,加入 1mL 试剂三充分溶解,90℃水浴 10min,冷却后待测。

测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,蒸馏水调零。

测定管:在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20uL 样本, 14uL 试剂四,120uL 蒸馏水,2uL 试剂五,44uL 蒸馏水,混匀,分别测定 550 和 743nm 处吸光值,ΔA 测定=A550-A743。

空白管:在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20uL 试剂三, 14uL 试剂四,120uL 蒸馏水,2uL 试剂五,44uL 蒸馏水,混匀,分别测定 550 和 743nm 处吸光值,ΔA 空白=A550-A743。

支链淀粉含量计算:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y=0.1214x+0.0076;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA 测定-ΔA 空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA 测定-ΔA 空白-0.0076) ÷Cpr

2、按样本干重计算

支链淀粉含量(mg/g 干重)= [(ΔA 测定-ΔA 空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA 测定-ΔA 空白-0.0076) ÷WV1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准条件下测定的回归方程为 y= 0.0607x+0.0076;x 为标准品浓度(mg/mL),y 为吸光值。

1、按照蛋白浓度计算

支链淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA 测定-ΔA 空白-0.0076)×V1]÷0.0607 ÷(V1×Cpr)=16.47×(ΔA 测定-ΔA 空白-0.0076) ÷Cpr

2、按样本干重计算

支链淀粉含量(mg/g 干重)= [(ΔA 测定-ΔA 空白-0.0076)×V1] ÷0.0607÷(W×V1÷V2) =16.47×(ΔA 测定-ΔA 空白-0.0076) ÷WV1:加入反应体系中样本体积,0.02mL;V2:加入提取液体积,1 mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g最低检测限为 10mg/g 干重或 0.1mg/mgprot。


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