在线客服
热线电话

微信公众号

企业微信
我的购物车 0

6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒 BES-BK2016B

6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒

销售价
¥ 140.00 /盒
市场价
¥160.00
  • 累计评价

    0
  • 累计销量

    0
配送至
请选择地址
可配送 快递:免邮
服务
博尔森生物科技有限公司-科研服务一站式网站发货并提供售后服务

数量
+ -
库存99盒
二维码图片
商家服务
优质服务 售后无忧
高效物流 安全配送
一站式采购
会员特权 优惠不断
文献奖励

看了又看

  • 硫氧还蛋白氧化还原酶(TrxR)测试盒 BES-BK2027B

    ¥230.00

  • 蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒 BES-BK2026B

    ¥1580.00

  • 肌酸激酶测试盒 BES-BK2021B

    ¥800.00

6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脱氢酶测试盒


注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

磷酸戊糖途径途径中 6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G6PDH)和 6PGDH 依次催化 NADPH 合成,与能量的平衡、生长速率和细胞活力等密切相关。此外,6PGDH 逆境生理中具有重要作用。

测定原理

6PGDH 催化 6-磷酸葡萄糖酸和 NADP+生成 NADPH,NADPH 在 340 nm 有特征吸收峰,而NADP+没有;通过测定 340nm 吸光度增加速率,计算 6PGDH 活性。

自备仪器和用品

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、1mL 石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前配制,加入 5 mL 试剂一,混匀。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前配制,加入 5 mL 试剂一,混匀。

粗酶液提取

1. 组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

3. 血清、培养液等液体:直接测定。

测定操作

1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂一置于 25℃或者 37℃水浴预热 30 min。

3. 空白管:取 1mL 石英比色皿,依次加入 100μL 蒸馏水,100μL 试剂二,700μL 试剂一,100μL 试剂三,于 340nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10s 吸光值记为 A1,第 190s 吸光值记为 A2。△A 空白管=A2-A1

4. 测定管:取 1mL 石英比色皿,依次加入 100μL 粗酶液,100μL 试剂二,700μL 试剂一,100μL 试剂三,于 340nm 处测定 3min 内吸光值变化,第 10 s 吸光值记为 A3,第 190s 吸光值记为 A4。△A 测定管=A4-A3

注意:空白管只需要做一次。

计算公式

(1) 按照蛋白浓度计算

活性单位定义:每毫克蛋白每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。

6PGDH 酶活性(nmol/min/mg prot)= [(△A 测定管-△A 空白管)×V 反总÷ε÷d×109]÷(Cpr×V样)÷T = 535.9×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr

(2) 按照样本质量计算

活性单位定义:每克组织每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。

6PGDH 酶活性(nmol/min/g) = [(△A 测定管-△A 空白管)×V 反总÷ε÷d×109]÷(W×V 样÷V 样总)÷T = 535.9×(△A 测定管-△A 空白管)÷W

(3) 按细胞数量计算

活性单位定义:每 104 个细胞每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。

6PGDH 酶活性(nmol/min/104cell) = [(△A 测定管-△A 空白管)×V 反总÷ε÷d×109]÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T = 535.9×(△A 测定管-△A 空白管)÷细胞数量

(4) 按液体体积计算

活性单位定义:每毫升液体每分钟催化产生 1nmol NADPH 的酶量为 1 个酶活单位。

6PGDH 酶活性(nmol/min/mL) = [(△A 测定管-△A 空白管)×V 反总÷ε÷d×109]÷V 样÷T = 535.9×(△A 测定管-△A 空白管)ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103

L / mol /cm;d:比色皿光径,1 cm;V 反总:反应体系总体积,0.001 L;Cpr:粗酶液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定,建议使用本公司 BCA蛋白质含量测定试剂盒;V 样:反应体系中加入粗酶液体积,0.1 mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,3 min。

注意事项

(1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在提取当日完成酶活性测定,粗酶液避免反复冻融;

(2)试剂二和试剂三须现配现用,当天未用完试剂保存在 4℃,可保存 2 天。


因厂家更改商品包装、场地、附配件等不做提前通知,且每位咨询者购买、提问时间等不同。为此,客服给到的回复仅对提问者3天内有效,其他网友仅供参考!给您带来的不便还请谅解,谢谢!

  • 全部
  • 商品咨询
  • 支付问题
  • 发票及保修