游离脂肪酸含量测试盒-测植物组织

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

FFA 既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA 的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。

测定原理：

在弱酸性条件下，FFA 与铜盐反应生成铜皂，在 715nm 处有特征吸收峰，在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。

自备仪器和用品：

研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿。

试剂组成和配制：

试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。

试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

样品中 FFA 提取：

组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~12 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1.2mL 试剂一）加入试剂一，震荡提取 3h，8000g，4℃离心 10min，取上清液待测。

测定操作：

1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 715 nm。

2. 对照管：取上清液 1mL，加 0.5mL 试剂二，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 0.8mL于 1mL 玻璃比色皿，调零。

3. 测定管：取上清液 1mL，加 0.5mL 试剂三，充分震荡 5min，室温静置 5min，取上层 0.8mL于 1mL 玻璃比色皿，测定吸光值，记为 A。

注意：对照管每个样品都需要测定一次。

FFA 含量计算公式：

标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994

（1）按样本蛋白浓度计算

FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)=133×(A-0.0055)÷Cpr

（2）按样本质量计算

FFA（nmol/g 鲜重）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)=160×(A-0.0055)÷WV1：加入样本体积，1mL；V2：提取液体积，1.2mL； Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g。

注意事项：

1. 蛋白含量不可直接用提取的上清液直接测定，可用蒸馏水或缓冲液或生理盐水选用本公司的 BCA 法蛋白含量测定试剂盒。

2. 最低检出限为 2 nmol/mL。