甘油三酯(TG)含量测试盒
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
TG 是长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子,不仅是细胞膜的主要成分,也是重要呼吸底物。
测定原理:
用异丙醇提取 TG,脂蛋白酯酶水解 TG 生成甘油和脂肪酸(FFA),甘油与三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成 H2O2,过氧化物酶催化过氧化氢氧化 4-氨基安替比林偶联酚,生成有色化合物,在 505 nm 处有特征吸收峰。
自备仪器和用品:
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液枪、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水
试剂组成和配置:
试剂一:液体 60 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂二:液体 26 mL×1 瓶,4℃保存。
试剂三:液体 26 mL×1 瓶,4℃避光保存。
TG 的提取:
1、 组织中 TG 的提取:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一)进行冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即TG 待测液。
2、细胞、细菌中 TG 的提取:先收集 400-500 万细胞或细菌到离心管内,离心后弃上清,加 1mL 试剂一,超声波破碎 1min(强度 20%,超声 2s,停 1s),8000g,4℃离心 10min,取上清,即 TG 待测液。
3、血清(浆)样品:直接测定。
测定操作:
混匀,室温下静置 20min,于 505 nm 波长处读取吸光值,记为 A 空白和 A 测定,△A=A 测定-A 空白。空白管只需测一管。
计算公式:
标准曲线:y = 0.6522x - 0.0199; R2 = 0.9979;x:标准品浓度(mg/mL) y:吸光值差值 ΔA。
1. 血清(浆)中甘油三酯含量计算:
TG 含量(mg/mL)=(ΔA+0.0199)÷0.6522=1.533×(ΔA+0.0199)
2. 组织、细菌或细胞中甘油三酯含量计算:
(1)按样本蛋白浓度计算
TG 含量(mg/ mg prot)= (ΔA+0.0199)÷0.6522×V 样÷(Cpr×V 样)=1.533×(ΔA+0.0199)÷Cpr
(2)按样本质量计算
TG 含量(mg/ g 鲜重)=(ΔA+0.0199)÷0.6522×V 样÷(W×V 样÷V 样总)=1.533×(ΔA+0.0199)÷WV 样:加入样本体积,0.01 mL;V 样总:加入试剂一体积,1 mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL。
注意事项:
1. 试剂盒中有易挥发性物质,实验过程中需佩戴手套和口罩,试剂瓶盖打开后应该及时盖紧。
2. 最低检出限为 100μg/mL。