Hoechst33342/PI双染试剂盒

产品简介：

Hoechst33342/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒是采用 DNA 探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。

 Hoechst33342 染色液 A 可以透过正常细胞膜，而细胞凋亡后，细胞膜对 Hoechst33342 染色液 A 的通透性增加，因此进入凋亡细胞中的 Hoechst 33342 比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体 DNA 的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与 DNA 结合，并且凋亡细胞膜上的 p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将 Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。

 PI 染色液 B 不能透过细胞膜，对正常细胞和凋亡细胞不能染色，而对坏死细胞可以染色。

 用两种染色液对细胞进行双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜即可对细胞状态进行检测。在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。

产品应用：

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

4.染色浓度和时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

5.染色后立即进行分析。

1. 染色缓冲液工作液的配制：

根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取 100 μL 试剂 C 加 900 μL 无菌纯水稀释，混匀即成 1*染色缓冲液工作液。

2. 收集样本细胞，细胞数量在 1X10⁶ 个以内。

3. 用 PBS 洗涤细胞两次。

4. 用 500 μL-1 ml 染色缓冲液将细胞重悬。

5. 加入 5-10 μl Hoechst33342 染色液 A。

6. 轻轻混匀后 4℃避光孵育 10 分钟。

7. 加入 5-10 μl PI 染色液 B。

8. 轻轻混匀后 4℃避光孵育 5-10 分钟。

9. 用 PBS 洗涤细胞。

10. 用 PBS 重悬细胞。

11. 用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。HO33342 用紫外光激发，PI 用蓝光激发。Hoechst33342-DNA 复合物的最大激发波长为 350nm，最大发射波长为 460nm，PI-DNA 复合物的最大激发和最大发射波长分别为488nm 和 615nm。

结果分析 ：

正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。

形态学：正常细胞核形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；凋亡细胞的核呈亮蓝色，或核呈分叶状，碎片状。坏死细胞核红色。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。