AO/EB双染试剂盒

产品简介：

AO/EB 双染细胞凋亡检测试剂盒是采用 DNA 探针双染细胞核的方法检测细胞的状态，是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。

 吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种具有细胞膜通透性的荧光染料，该染料能透过活细胞膜，使核 DNA 和 RNA 染色。它与细胞中 DNA 和 RNA 结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，AO 与 dsDNA 结合时发出绿色荧光，而与 ssDNA 和 RNA 结合时发出红色荧光。当与 DNA 结合时，它与荧光素在光谱上非常相似，激发最大值为 502nm，发射最大值为 525nm（绿色）。当它与 RNA 结合时，激发最大值移至 460nm（蓝色），发射最大值移至 650nm（红色）。

 在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙 AO 常与溴化乙啶 EB 合用双染，因 EB 只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。

 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

产品应用：

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，其他方法请参阅相关资料。

4.AO 将 DNA 染成绿色，RNA 染成红色，红色荧光在激发光下不久就会消失，等 AO 的红色荧光消失之后再拍照，否则会干扰 EB 的红色坏死细胞。

1. 染色缓冲液的配制：根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取 100 μL 试剂 C 加 900 μl 无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。

2. 收集样本细胞，细胞数量在 10X10⁵ 个以内。

3. 用 PBS 洗涤细胞两次。

4. 用 500 μl 染色缓冲液将细胞重悬。

5. 加入 5μl AO 染色液 A。

6. 加入 5 μl EB 染色液 B。

7. 轻轻混匀后 4℃避光孵育 10-20 分钟。

8. 用 PBS 洗涤细胞。

9. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。AO-DNA 复合物的最大激发波长为 488nm，最大发射波长为515nm，EB-DNA 复合物的最大激发和最大发射波长分别为 518nm 和 605nm。

结果分析 ：

正常活细胞的核染色质着绿色，形态结构正常；早期凋亡细胞的膜结构完整，核染色质着绿色，但核已开始固缩或呈串珠状；晚期凋亡细胞，核染色质发橙红色荧光，呈固缩状或串珠状，有时核碎裂散布于胞浆中；有时还可见到细胞核结构正常，但细胞着红色，为非凋亡的死亡细胞。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。