在线客服
热线电话

微信公众号

企业微信
我的购物车 0

线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C氧化酶测试盒 BES-BK2504B

线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C氧化酶测试盒

销售价
¥ 2480.00 /盒
市场价
¥2500.00
  • 累计评价

    0
  • 累计销量

    0
配送至
请选择地址
可配送 快递:免邮
服务
博尔森生物科技有限公司-科研服务一站式网站发货并提供售后服务

规格
测试方法
数量
+ -
库存99盒
二维码图片
商家服务
优质服务 售后无忧
高效物流 安全配送
一站式采购
会员特权 优惠不断
文献奖励

看了又看

  • 线粒体分离和线粒体酶提取试剂盒 BES-BK2519B

    ¥280.00

  • 叶绿体分离和叶绿体酶提取试剂盒 BES-BK2518B

    ¥280.00

  • 转氢酶-2试剂盒 BES-BK2516B

    ¥630.00

 线粒体呼吸链复合体Ⅳ/细胞色素C氧化酶测试盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

线粒体复合体Ⅳ又称细胞色素 C 氧化酶,也是线粒体呼吸电子传递链主路和支路的共有成分,负责催化还原型细胞色素 C 的氧化,并最终把电子传递给氧,生成水。

测定原理:

还原型细胞色素 C 在 550nm 有特征光吸收,线粒体复合体Ⅳ催化还原型细胞色素 C 生成氧化型细胞色素 C,因此 550nm 光吸收下降速率能够反映线粒体复合体Ⅳ酶活性。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 100mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂二:液体 20mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂三:液体 1.5mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂四:液体 20mL×1 瓶,4℃保存;

试剂五:粉剂×1 支,-20℃保存;

试剂六:粉剂×1 支,-20℃保存;

样本的前处理:

组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:

1、 准确称取 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2、 将匀浆 600g,4℃离心 5min。

3、 弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11100g,4℃离心 10min。

4、 上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ(此步可选做)。

5、 步骤④中的沉淀即为线粒体,加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10 秒,重复 30 次),用于复合体Ⅳ酶活性测定。

测定步骤:

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 550nm,蒸馏水调零。

2、 样本测定

(1)工作液的配制:临用前将试剂五和试剂六依次转移到试剂四中混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)孵育 5min;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

(2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 20μL 样本和 200μL 工作液,混匀,记录 550nm处初始吸光值 A1 和 37℃反应 30min 后的吸光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。

注意点:若 ΔA 大于 0.2,需将样本用试剂二稀释适当倍数(计算公式中乘以相应稀释倍数),使 A1-A2 小于 0.2,可提高检测灵敏度。

复合体Ⅳ活力单位的计算:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下:

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化降解 1 nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力单位。

复合体Ⅳ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=19.20×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每 g 组织每分钟催化降解 1nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力单位。

复 合 体 Ⅳ 活 力 (nmol/min/g 鲜 重 )=[ΔA×V 反 总 ÷ ( ε×d ) ×109]÷(W× V 样 ÷V 样总)÷T=3.88×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化降解 1nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力单位。

复合体Ⅳ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.008×ΔAV 反总:反应体系总体积,2.2×10-4L;ε:细胞色素 C 摩尔消光系数,1.91×104L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积,0.02 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下:

(1) 按样本蛋白浓度计算

单位的定义:每 mg 组织蛋白每分钟催化降解 1 nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力单位。

复合体Ⅳ活力(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=38.39×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

(2) 按样本鲜重计算

单位的定义:每 g 组织每分钟催化降解 1nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力单位。

复 合 体 Ⅳ 活 力 (nmol/min/g 鲜 重 )=[ΔA×V 反 总 ÷ ( ε×d ) ×109]÷(W× V 样 ÷V 样总)÷T=7.76×ΔA÷W

(3) 按细菌或细胞密度计算

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞每分钟催化降解 1nmol 还原型细胞色素 C 定义为一个酶活力单位。

复合体Ⅳ活力(nmol/min/104cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.016×ΔAV 反总:反应体系总体积,2.2×10-4L;ε:细胞色素 C 摩尔消光系数,1.91×104L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本体积,0.02 mL;V 样总:加入提取液体积,0.202mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细胞或细菌总数,500 万。


因厂家更改商品包装、场地、附配件等不做提前通知,且每位咨询者购买、提问时间等不同。为此,客服给到的回复仅对提问者3天内有效,其他网友仅供参考!给您带来的不便还请谅解,谢谢!

  • 全部
  • 商品咨询
  • 支付问题
  • 发票及保修