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谷氨酸(Glu)含量测试盒 BES-BK2550B

谷氨酸(Glu)含量测试盒

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谷氨酸(Glu)含量测试盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义:

Gu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一,而且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成,是生物体内主要氨基来源之一。此外,Glu 还是味精的主要有效成分,常用做食品添加剂以及香料生产。

测定原理:

利用专用提取液提取,然后用显色剂进行显色,显色后在 570nm 下进行测定。

需自备的仪器和用品:

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1 mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

试剂的组成和配制:

试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存;

试剂二:粉剂×1 瓶, 4℃保存;临用前加入 10mL 蒸馏水,充分混匀溶解,用不完的试剂仍 4℃保存。

谷氨酸提取:

1、细菌或培养细胞样品:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104 个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 1000 万细菌或细胞加入2mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 常温离心 10min,取上清,置冰上待测。

2、组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.2g 组织,加入 2mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min,取上清,置冰上待测。

3、血清(浆)或细胞培养液样品:按照血清(浆)或细胞培养液体积(mL):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取 0.2mL 血清(浆)或者细胞培养液加入 2mL 试剂一),进行冰浴匀浆。8000g 常温离心 10min,取上清,置冰上待测。

测定步骤

1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长至 570nm,蒸馏水调零。

2、 在有盖 EP 管中加入下列试剂:

2021091711363181931

混匀,90℃水浴 20min(盖紧,以防止水分散失),流水冷却,于 570nm 波长处比色,△A=A测定管-A 对照管。对照管只要做一管。

谷氨酸含量计算:

1、标准条件下测定回归方程为 y = 0.0074x- 0.5255;x 为谷氨酸含量(µg/mL),y 为吸光值。

2、按照血清(浆)或者细胞培养液体积计算

谷氨酸含量(μg/mL)= [(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V3×V1÷V2)=1351×(△A+0.5255)

3、按照蛋白浓度计算

谷氨酸含量(µg/mg prot)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(V1×Cpr)=135.1×(△A+0.5255) ÷Cpr

4、按照样本质量计算

谷氨酸含量(µg/g 鲜重)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(W ×V1÷V2)=270.2×(△A+0.5255) ÷W

5、按照细菌或细胞密度计算

谷氨酸含量(μg/104cell)=[(△A +0.5255)÷0.0074×V1]÷(1000×V1÷V2)=0.27×(△A+0.5255)V1:加入反应体系中样本体积,1mL;V2:加入提取液体积,2 mL;V3:加入血清(浆)或细胞培养液体积,0.2 mL; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;1000:细菌或细胞总数,1000 万。

注意:

1、该试剂盒仅适用于发酵液或组织中谷氨酸含量测定,检测下限为 100µg/mL。

2、标准曲线线性范围为:100µg/mL -600µg/mL。

3、ΔA 线性范围为:0.01-2;若大于 2 则需要将上清液用试剂一稀释至适当倍数后测定,计算公式中乘以相应稀释倍数。


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