尿酸含量测试盒
注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义
UA 是鸟类和爬行类动物的主要代谢产物,正常人体尿液中产物主要为尿素,含少量尿酸。此外,UA 还是重要的抗氧化剂,能清除超氧化物,羟自由基等。体内 UA 生成量和排泄量不平衡会导致多种疾病的发生。例如,血中 UA 升高会引起痛风、肾功能损害和动脉硬化,相反 UA 降低会引起恶性贫血,在临床诊断上具有重要的意义。
测定原理
尿酸酶能催化 UA 生成尿囊素,CO2及 H2O2,H2O2 氧化亚铁氰化钾中的 Fe2+ 生成 Fe3+ ,Fe3+进一步与酚和 4-氨基安替比林缩合生成红色醌类化合物,在 505nm 下有特征吸收峰,测定反应体系 505nm 的吸收值,可计算尿酸的含量。
自备实验用品及仪器
恒温水浴锅、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。
试剂的组成和配制
缓冲液:液体 15mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:
A. 用于标准管和测定管,粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 10mL 缓冲液溶解。
B. 用于空白管,粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 5mL 缓冲液溶解。
试剂二:粉剂 1 瓶,4℃避光保存,使用前加 10mL 双蒸水水置于 60℃加热溶解。
样品的制备:
1. 动植物组织:建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 生理盐水或蒸馏水,进行冰浴匀浆,然后 8000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2. 血清,培养液:直接检测。
测定操作表
UA 含量计算公式
1. 组织:
(1)按样本重量计算
尿酸含量(μmol/g 鲜重)=C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷(W÷V样总)=0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
(2)按样本蛋白浓度计算
尿酸含量(μmol/mg prot)=C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr=0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷Cpr
尿酸(μmol/L)= C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)×103=500×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
C 标:标准品浓度 0.5μmol/mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样品质量,g ;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;103 :1μmol/ L=103μmol/ mL
注意事项
1. 血清样本请在 24 小时内测定,或者 4℃密封避光保存不超过 72 小时。
2. 吸光值大于 0.8 可用蒸馏水稀释样本,并在计算公式中算入稀释倍数。
3. 最低检出限为 10μmol/L。