在线客服
热线电话

微信公众号

企业微信
我的购物车 0

脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性测试盒 BES-BK2720B

脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性测试盒

销售价
¥ 1180.00 /盒
市场价
¥1200.00
  • 累计评价

    0
  • 累计销量

    0
配送至
请选择地址
可配送 快递:免邮
服务
博尔森生物科技有限公司-科研服务一站式网站发货并提供售后服务

规格
测试方法
数量
+ -
库存99盒
二维码图片
商家服务
优质服务 售后无忧
高效物流 安全配送
一站式采购
会员特权 优惠不断
文献奖励

看了又看

  • 脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性测试盒 BES-BK2727B

    ¥600.00

  • 单脱氢抗坏血酸还原酶(MDHAR)测试盒 BES-BK2726B

    ¥780.00

  • 抗坏血酸过氧化物酶(APX)测试盒 BES-BK2725B

    ¥560.00

脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)活性测试盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

DHAR 存在于细胞质、线粒体和叶绿体中。DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA 和 GSSG,调控细胞 AsA/DHA 比值,是抗坏血酸-谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶。提高植物体内的DHAR 活性,可提高植物食品中 AsA 含量,进而提高植物食品的营养品质。

 测定原理:

DHAR 催化 GSH 还原 DHA 生成 AsA,通过测定 DHA 减少速率,计算 DHAR 活性。 

实验中所需仪器及设备:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、可调式移液器和蒸馏水。 

试剂组成和配制:

试剂一:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 17.5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶(棕色),4℃保存。临用前加入 2.5 mL 蒸馏水充分溶解。

试剂四:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加入 2.5 mL 蒸馏水充分溶解。 粗酶液提取:

1. 按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入1mL 试剂一)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 10min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入 1mL 试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);8000g 4℃离心 20min,取上清液置冰上混匀待测。

3. 血清等液体:直接测定。

DHAR 测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热 30 min,调节波长到 265nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在 25℃水浴锅中预热 30 min。

3. 在微量石英比色皿/96 孔板中依次加入 20μL 试剂三、20μL 试剂四和 140μL 试剂二,最后加 20μL 上清液迅速混匀后于 265nm 比色,记录 30s 和 150s 的吸光值 A1 和 A2,△A=A2-A1。

DHAR 活性计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T= 92×△A ÷Cpr

(2). 按样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

DHAR(nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 92×△A ÷W

(3). 按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每 104个细胞每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

= 92×△A ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷V 样÷T= 92×△Aε :AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol /cm;106:摩尔分子换算成微摩尔分子;d:比色杯光径,1cm;V 反总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4 L;V 样:反应体系中加入上清液体积,20μL =0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL;W :样品质量;T:反应时间,2 min。

b.使用 96 孔板测定的计算公式如下

(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

DHAR(nmol/min/mg prot) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(Cpr×V 样)÷T= 184×△A ÷Cpr

(2). 按样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

DHAR(nmol/min/g 鲜重) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(W×V 样÷V 样总)÷T= 184×△A ÷W

(3). 按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每 104个细胞每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

DHAR(nmol/min/104 cell) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷(细胞数量×V 样÷V 样总)÷T

= 184×△A ÷细胞数量

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升样本每分钟还原生成 1nmol AsA 为 1 个酶活单位。

DHAR(nmol/min/mL) = △A÷ε÷d×V 反总×109÷V 样÷T= 184×△Aε :AsA 在 265nm 处摩尔吸光系数为 5.42×104 L/mol /cm;106:摩尔分子换算成微摩尔分子;d:96 孔板光径,0.5 cm;V 反总:反应体系总体积,0.2mL=2×10-4 L;V 样:反应体系中加入上清液体积,20μL =0.02mL;V 样总:提取液体积,1 mL;Cpr:上清液蛋白浓度,mg/mL;W :样品质量;T:反应时间,2 min。

注意事项:

临用前配制的试剂未使用完的 4℃保存,3 天内使用完。


因厂家更改商品包装、场地、附配件等不做提前通知,且每位咨询者购买、提问时间等不同。为此,客服给到的回复仅对提问者3天内有效,其他网友仅供参考!给您带来的不便还请谅解,谢谢!

  • 全部
  • 商品咨询
  • 支付问题
  • 发票及保修