胼胝质含量测试盒

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

胼胝质（callose）是围绕每个筛孔的边缘积累的碳水化合物，是一种以 β-1,3 键结合的葡聚糖，在植物的筛管代谢、配子体发育等生命活动中发挥着重要的调节作用，其合成、分解直接关系植物正常的生长代谢过程。

测定原理：

胼胝质与苯胺蓝染料反应，产生荧光物质，在激发波长 400nm，发射波长 500nm 下测定荧光强度。

自备仪器和用品：

研钵、冰、低温离心机、荧光酶标仪、黑色 96 孔板、可调式移液器、乙醇和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃避光保存；临用前加入 10mL 试剂二充分溶解待用。

试剂二：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 25mL×1 瓶，4℃保存。

样品中胼胝质提取：

切取约 0.1g 样本于 EP 管，用 98%的乙醇浸泡过夜。然后弃掉乙醇，加入 1mL 提取液，充分匀浆，80℃水浴 20min，10000g 25℃离心 10min，取上清待测。

测定操作：

1.工作液配制（临用前按照样本数量，按以下比例配制工作液）

2. 样本测定

充分混匀，50℃水浴 30min，冷却至室温。取 200µL 于黑色 96 孔板，激发波长 400nm，发射波长 500nm，测定荧光强度。记作 A 测定与 A 对照，ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管设一个对照管。

胼胝质含量计算公式:

以昆布多糖为标准品，标准条件下的曲线为 y = 1280.3x + 591.79，R2 = 0.998；x 为标准品浓度 mg/mL，y 为荧光强度

胼胝质(µg/g 鲜重) =(ΔA-1571.8)÷462.42×V 样÷(W×V 样÷V 总)×1000=0.781×(ΔA- 591.79)÷WV 样：加入样品体积，0.04mL；V 总：加入提取液体积，1.0 mL; W：样品质量（g）；1000，mg 到 µg 的换算系数。