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二氢黄酮醇还原酶(DFR)测试盒 BES-BK2067B

二氢黄酮醇还原酶(DFR)测试盒

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二氢黄酮醇还原酶(DFR)测试盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

二氢黄酮醇还原酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶,在决定植物的花色、叶色、果色和其他经济器官的色泽及其营养品质方面起着重要作用。

测定原理

二氢黄酮醇还原酶作用于二氢槲皮素产生儿茶素,可与香草醛缩合形成红色化合物,在500nm 处有特征吸收峰。

需自备的仪器和用品

研钵、低温离心机、震荡仪、氮吹仪、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿、水浴锅、无水乙醇、乙酸乙酯,浓盐酸。

试剂组成和配制

提取液:液体 50mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 30mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 3mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1 瓶,4℃保存。临用前加 5mL 蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂四:粉剂×2 瓶,4℃避光保存,临用前每瓶加入 40mL 浓盐酸溶解待用;用不完的试剂4℃避光保存。

酶液提取

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

2. 液体:直接检测。

测定操作表

2021091105191467198

酶活性计算公式

标准曲线:y=0.0184x+0.0002,R2=0.999

(1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:在 30℃,pH7.5 条件下,每毫克蛋白每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性(mmol/min/mg prot)=(△A-0.0002)÷0.0184×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T÷2= 9.06×(△A-0.0002)÷Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活性定义:在 30℃,pH7.5 条件下,每克组织每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性(mmol/min/g 鲜重)= (△A-0.0002)÷0.0184×V 反总÷(V 样×W÷V 样总)÷T÷2= 9.06×(△A-0.0002)÷W

(3)按液体体积计算

酶活性定义:在 30℃,pH7.5 条件下,每毫升液体每分钟分解二氢槲皮素产生 1mmol 儿茶素所需的酶量为一个酶活力单位。

DFR 活性(mmol/min/mL)=(△A-0.0002)÷0.0184×V 反总÷V 样÷T÷2= 9.06×(△A-0.0002)V 反总:反应总体积,1mL;V 样:反应体系中样本体积,0.1mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min


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