考马斯亮蓝R250（粉末）

产品描述：

考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种相似三苯甲烷染料的总称，有G250和R250两种，结构上前者比后者多了2个甲基，命名上“G”为Green的缩写，因G250的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为Red的缩写，因R250的蓝色染料呈微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是：通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。

考马斯亮蓝R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高5倍，可达0.1 µg蛋白。R250染色后需要褪色，才能进行蛋白条带的观察。

考马斯亮蓝G250的检测灵敏度虽然较低，但也可替代R250，使用一种快速而简单的方法进行蛋白染色。因其具有以下特性，即在低于pH 2.0时，溶液无色；pH 7.0时溶液呈深蓝黑色；若发生酸化，溶液呈现透明的棕褐色。当G250与蛋白结合，溶液又回到蓝色，主要因为蛋白分子周围具有更偏中性的pH环境。合适条件下，当把胶放在酸化的G250溶液中染色，显示出蓝色的蛋白条带，背景呈浅琥珀色。此种方法条带快速显色，且背景颜色也很浅使得条带看起来很清楚，则不需要做褪色处理。大部分蛋白用G250检测的下限是0.5 µg。虽然灵敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比R250染色节省高达11 h。

运输与保存方法

室温运输和保存即可。

使用方法:

1.标准染色步骤（考马斯亮蓝R250）
1） 蛋白电泳凝胶置于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平摇床上低速摇动30 min~过夜。

2）去除固定液，更换0.25%考马斯亮蓝R250染色液（0.25% R250溶于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液）完全覆盖住胶，染色2-4 h。直至胶染成均匀的蓝色。
注意：当胶在染色液内肉眼不可见时，说明染色完成，否则与深色的染色液对比，凝胶区域看起来颜色偏浅。

3）将胶重新放置在5%甲醇，7.5%醋酸，87.5%水溶液中脱色4-24 h。约1-2 h后蛋白条带即可看到，直至背景变透明后脱色才结束。中间可更换2-4次脱色液。

注意：此方法可检测到的蛋白量最低达到0.1 µg蛋白/条带。

4）将胶存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

2.快速染色步骤（考马斯亮蓝R250）

1）蛋白电泳凝胶在25% IPA，10%醋酸的水溶液中固定30-60 min。

2）将胶放置在10%醋酸的水溶液中进行染色，含有60 µg/mL的考马斯亮蓝R250。约30 min后条带显示，让胶继续染色直至达到理想的蛋白条带。在此染色方法中胶的背景染色比较浅，由于使用胶的浓度很低。

3）将胶重新放在10%醋酸溶液中脱色2 h或更长。期间可更换2-4次脱色液。

4）将胶存放在7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

注意事项:

1）0.25%考马斯亮蓝R250染色液配置的过程中，需要先用甲醇溶解R250粉末后，再加入醋酸和水，一般情况下不需要滤纸除杂。溶液可在4℃存放6个月，若长时间保存出现沉淀，可用滤纸过滤得到澄清液体。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
3）本产品仅作科研用途！

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！