产品咨询
DOTAP真核细胞转染试剂
产品说明：
DOTAP是一种阳离子脂质体，可与DNA或RNA形成稳定的转染复合物进入细胞，并将核酸释放入细胞内。它以可靠性和高效性著称，是广泛使用的商品化转染试剂。我们的DOTAP真核细胞转染试剂是由DOTAP和中性辅助脂质以特定比例融合制备而成的单层脂质体悬液。这种制备方法增加了脂质体对真核细胞转染的高效性、广谱性、低毒性和可靠性，并使试剂在4°C储存至少稳定12个月。DOTAP可高效转染多种细胞，甚至在低浓度血清环境也可工作良好。它属于可被生物降解的脂质体因而细胞毒性明显降低，其转染效率高于Sigma公司的DOTAP单体转染试剂，与Invitrogen的LipofectAMINE相当，但其价格仅相当同类试剂的1/3。
转染时只需将稀释的DOTAP试剂与DNA溶液混合并室温放置15分钟即可加入细胞。1ml DOTAP可转染100-500µg DNA或50-100只35mm培养皿或250-1000孔24孔板细胞。
颜色：
清亮或略呈白色胶体溶液。
储存：
4°C储存12个月。切勿冻存。
适用：
将DNA、RNA、寡聚核苷酸转入真核细胞。适用于大多数传代或原代细胞。
效果展示：
DOTAP真核细胞转染试剂
图：293细胞于24孔板中生长至75%满(confluency)，每孔细胞分别用DOTAP真核细胞转染试剂(#C1510)和Invitrogen公司的LipofectAMINE转染各0.5 µg pEGFP质粒。转染24小时后观察绿色GFP荧光。
转染步骤：
以生长于24孔板的一个孔内的贴壁细胞为例，使用其它规格培养皿参见表一。
细胞准备：
转染前一天传0.5-2 x 105细胞于24孔板内，加1 ml正常培养基培养。在光镜下观察细胞，当细胞群覆盖培养瓶皿生长表面的85-95%时，为DOTAP转染的最佳时机。这通常需要18-24小时，但依细胞类型和接种量而变。注意：传代时接种过多的细胞，100%长满的细胞的转化效率明显降低
制备转染复合物：
对特定细胞类型来说，应该优化加入DNA (µg)和DOTAP (µl)比率和绝对量，参见后面附表。推荐DNA和DOTAP的初始比例为1:4。DNA (µg) ：DOTAP (µl) ＝ 1:2～1:8
转染实际上是人为造成细胞对外源物质的高摄取状态，因此过量摄入DNA和转染试剂将导致细胞毒性而降低转染效率。与细胞接触的转染混合物中DOTAP 的最大浓度不应超过30 µl/ml，DNA浓度应小于5µg/ml。
1. 取1µg DNA稀释到25µl 无血清无抗生素培养基，混匀。
2. 取2-8µl DOTAP 加入到25µl 无血清抗生素培养基，轻轻混匀。
3. 吸取稀释的DNA溶液加入到稀释的DOTAP溶液中，上下吹吸混匀，勿振荡。室温孵育15分钟。
如果按照相反的顺序将稀释的DOTAP溶液与DNA混合，将生成相反类型的DNA转染复合物，有可能会导致转染效率下降。
4. 在此期间用无血清培养基洗涤细胞1-2次，按照表一Step 5加入适宜体积的无血清无抗生素培养基。
5. 加入步骤3获得的转染复合物于培养瓶皿内，轻轻混合与细胞充分接触，开始转染细胞。
6. 二氧化碳孵箱37C孵育细胞4小时。
7. 吸除转染混合物，加入含血清的正常培养基；或直接将含血清培养基加到孔内，继续培养24小时以上。观察细胞，进行下一步实验。或1:10稀释传 代，进行G418筛选。