BCA蛋白法含量测试盒

正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定

测定意义：

样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。

测定原理：

碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将 Cu2+还原成 Cu+；2 分子的 BCA 与 Cu+结合，生成紫色络合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 处吸收峰最强。

自备仪器和用品：

台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制：

试剂 A：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。

试剂 B：液体 0.4mL×1 支，4℃保存。

标准品：液体 2mL×1 支，4℃保存。

工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2mL），将试剂 A 和 B 按照 50：1的比例混合，盖紧后充分混匀。

样品中可溶性蛋白质提取：

1. 液体样品：澄清液体样品可以直接测定。

2. 组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g组织，加入 1mL 提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。

3. 细菌、细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。

测定操作：

1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 562 nm，蒸馏水调零。

2. 工作液置于 60℃水浴预热 30 min。

计算公式：

Cpr (mg/mL)= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管） =0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）

Cpr (mg/g 鲜重)= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷ W =0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷ WW: 样本质量，g

注意事项：

BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在 20-5000μg/ml 样品。测定前取 1-2 个样做预实验，若 A 测定管－A 空白管﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定的准确性。