外泌体RNA分离试剂盒

保存与应用 

【保存条件】 

本试剂盒低温下运输，室温或 2-8℃下保存至少一年（按照试剂盒不同成分分别 保存），使用前请详细阅读说明书。

【应用范围】

本产品只用于科学研究，不能用于临床诊断。

产品介绍

外泌体（Exosome）是由不同细胞分泌的直径 30-150nm 的胞外膜性囊泡 （Extracellular Vesicles，EVs）。外泌体普遍存在于多种体液中，其内容物丰富， 包括蛋白质、脂质和核酸等，在细胞间信息交流中发挥着重要作用，主要参与免 疫抗原呈递，神经递质传递，脂类代谢及细胞信号转导等过程，并与多种疾病的 发生、发展、治疗及预后密切相关。
研究表明，胞外膜性囊泡（包括外泌体）内容物中富含不同类型 RNA（mRNA、 microRNA、LncRNA、CircRNA 等）。microRNA（miRNA）在基因转录和转录 后调节方面起重要作用，与疾病的发生、发展密切相关，因此，某些外泌体 miRNA （exo-miRNA)可以作为疾病的新的治疗靶标和诊断生物标记物。
外泌体 RNA 分离试剂盒（Exosome RNA Isolation Kit）采用酚/胍盐方法提 取已分离的外泌体中总 RNA（含有 miRNA），这里外泌体分离方法可以包括超 速离心、化学沉淀、免疫捕获和分子大小排阻等，接下来采用核酸特异吸附柱 （Spin Columns），可方便、快捷地纯化和洗脱外泌体 RNA，可直接用于下游应 用，如 RT-qPCR，Northern blot，芯片表达谱，NGS 测序等。

试剂盒组成和说明

*使用前先在每瓶洗涤液 A (Wash Solution A)中加入 45ml 无水乙醇，混匀，并在瓶标签上标 记“√”，每次使用后立即盖紧瓶盖。操作方法

 【注意事项】
1. 除了裂解液 A （Lysis Buffer A）保存在 2-8℃外，其余试剂盒和耗材保存在 室温下(15-25oC)，自购买之日起有效期至少一年。裂解液 A 在使用前检查是否 有盐沉淀，建议在使用前 37℃水浴 10 分钟，混合均匀，无沉淀，溶液清澈。
2. 预防 RNase 污染，应注意以下几方面：
经常更换新手套，防止皮肤表面 RNase 污染。
使用无 RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
RNA 释放后在裂解液中不会被 RNase 降解，但提取后继续处理过程中应使 用不含 RNase 的塑料盒或玻璃器皿，玻璃器皿可在 150℃烘烤 4h，塑料器皿 可在 0.5M NaOH 中浸泡 10 min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除 RNase。
配制溶液应使用无 RNase 的水（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 终浓度 0.1%（v/v），放置过夜，高压灭菌）。 3. 需要自备试剂：96-100% 乙醇。

操作方法

注意：使用前先在每瓶洗涤液 A (Wash Solution A)中加入 45ml 无水乙醇，混匀，并在瓶标 签上标记“√”，每次使用后立即盖紧瓶盖。
1. 外泌体 RNA 释放

取 300μl 分离的外泌体溶液，加入等体积（300μl）的裂解液 A，涡旋振荡 30sec，
室温放置 5min，使得核酸蛋白复合物完全分离。  室温 12,000×g 离心 10min，取上清，转入一个新的无 RNase 的离心管中。
加入 150μl 裂解液 B，盖好管盖，剧烈振荡 15sec，室温放置 5min。室温 12,000×g 离心 15min，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和无色的水 相，RNA 主要在水相中（上层），把水相转移到新管中(避免吸取中间层)， 进行下一步操作。
量取转移液的体积，缓慢加入 1.5 倍体积预冷的无水乙醇（如 400μl 的转移 液加 600μl 无水乙醇），混匀（此时可能会出现沉淀）后室温静置 5-10min。
注意：样本及裂解液 A 在使用前应恢复室温，为了提高提取效率建议裂解液 A 使用前 37℃ 水浴 10 分钟后使用。当裂解液 A 加入后出现核酸蛋白复合物未完全解离的现象，可额外补 加 100μl 裂解液 A。

2. 外泌体 RNA 分离

将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱中（吸附柱放入收集管中，当溶液总体 积超过 700μl 时，可分两次完成)，室温放置 2min，室温 8,000×g 离心 30sec，离 心后弃掉滤液，保留吸附柱。

3. 外泌体 RNA 洗涤

向吸附柱加入 500μl 洗涤液 A（请检查是否已加入指定量的无水乙醇），室 温 8,000×g 离心 30sec，倒掉收集管中的滤液，将吸附柱放入收集管中。重复洗 涤 1 次后，空柱室温 12,000×g 再离心 2min，去除残余液体。打开吸附柱盖子， 将吸附柱置于室温放置数分钟（5-10min），以彻底晾干吸附材料中残余的洗涤 液。
注意：这一步的目的是将吸附柱中的残余的洗涤液去除，洗涤液中的乙醇的残留会影响后续 的酶反应（酶切、PCR 等）实验。

4.外泌体 RNA 洗脱

将吸附柱转入 1.5 ml 离心管中（试剂盒提供），向吸附柱中间位置悬空滴加 50-200μl 洗脱液 A，室温放置 2-5min，室温 12,000×g 离心 2min，将溶液收集到 离心管中。
注意：洗脱液体积不应小于 50μl，体积过小影响回收效率，为增加 RNA 的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱中，室温放置 2min，12,000×g 离心 2min。洗脱液的 pH 对于洗脱 效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证 pH 值在 7.0-8.5 范围内，pH 值低于 7.0 会降低洗 脱效率，且 RNA 产物最好立即使用，或保存在-80℃，以防止 RNA 降解。

用途：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。