植物叶绿素（chlorophyll）含量测试盒

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中，其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。

测定原理

叶绿素 a 和叶绿素 b 在 645nm 和 663nm 处有最大吸收，根据经验公式可计算得叶绿素 a 和叶绿素 b 以及总叶绿素含量。

自备实验用品及仪器

天平、研钵、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、10mL 玻璃试管、锡箔纸、丙酮。

试剂组成和配制

试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。

测定操作

1. 提取液的准备：取 120mL 蒸馏水和 480mL 丙酮，充分混匀待用。

2. 称取约新鲜植物叶片或其它绿色组织，去掉中脉，称取约 0.1g，剪碎，用蒸馏水洗干净。

3. 加入 1mL 蒸馏水，少量试剂一（约 50mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入 10mL玻璃试管。

4. 用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入玻璃试管，用提取液定容至 10mL，玻璃试管置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提 3h，观察试管底部组织残渣完全变白则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至其完全变白。

5. 取浸提液 1mL 于 1mL 玻璃比色皿，提取液调零，测定 663nm 和 645nm 处吸光值，分别记为 A663 和 A645 。

计算公式

叶绿素 a 含量（mg/g 鲜重）=（12.7× A663 – 2.69 × A645）×V 提×D÷m÷1000 = 0.01×（12.7× A663 – 2.69 × A645）×D÷m

叶绿素 b 含量（mg/g 鲜重）=（22.9× A645 – 4.68 × A663）×V 提×D÷m÷1000 = 0.01×（22.9× A645 – 4.68 × A663）×D÷m

叶绿素总含量（mg/g 鲜重）=（20.21× A645 +8.02 × A663）×V 提×D÷m÷1000 = 0.01×（20.21× A645 +8.02 × A663）×D÷m

V 提：提取液体积，10mL；D：稀释倍数；m：样本质量，g

注意事项

1. 叶绿素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。

2. 一定要浸提至组织残渣完全变白，否则提取不充分。

3. 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至玻璃试管。

4. 测定时吸光值超过 1，可进行适当稀释。