蔗糖合成酶（合成方向 SS-Ⅱ)测试盒

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖是源（叶片等）光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之一。研究其合成方向 SS-Ⅱ的活性对于植物蔗糖合成具有重要意义。

测定原理

SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体 UDPG 反应生成蔗糖，蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化，在 480nm 下有特征吸收峰，酶活力大小与颜色的深浅成正比。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰

试剂的组成和配制

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 2.5mL×1 瓶，-20℃保存；

试剂二：1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶，4℃保存；

试剂三：液体 2mL×1 瓶，4℃保存

试剂四：液体 25mL×1 瓶，4℃保存；

试剂五：液体 6mL×1 瓶，4℃保存；

样品测定的准备：

按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

测定步骤

1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 480nm，蒸馏水调零。

2、样本测定，（在 EP 管中依次加入下列试剂）：

混匀，沸水浴 30min，冷却后，取 200μL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，480nm 下测定各管吸光值。标准管和空白管只要做一管。每个测定管需要设一个对照管。

SS-Ⅱ活性计算

1、按照蛋白浓度计算

单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷Cpr

2、按照样本鲜重计算

单位定义：每 g 组织每分钟催化产生 1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。

SS-Ⅱ活性(μg /min/g 鲜重) = C 标准管×V1×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×（A 测定管-A 对照管)÷（A 标准管-A 空白管)÷WC 标准管：标准管浓度，1000μg/mL；V1：加入反应体系中样本体积，0.01mL； V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；T ：反应时间：10min。