肌酸激酶测试盒

注意˖正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定DŽ

测定意义

CK(EC 2.7.3.2)ѫ要存在于心脏ǃ肌肉以及脑等组织中，能可逆地催化肌酸о ATP 之间的转磷酰基反应，在能䟿运转ǃ肌肉收缩和 ATP 再生中有重要作用，是临床诊断心脑疾病的一个重要指标

测定原理

CK 催化磷酸肌酸和 ADP 生成肌酸和 ATP，己糖激酶催化 ATP о葡萄糖形成 6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化 6-磷酸葡萄糖о NADP+生成 NADPH，导致 340nm 光吸收值增加

自备实验用品及仪器

天平ǃվ温离心机ǃ恒温水浴锅ǃ紫外分光光度䇑ǃ1 mL 石英比色皿和蒸馏水试剂组成和配制提取液˖液体 60mL×1 瓶，4℃保存

试剂一粉剂 1 瓶，4℃避光保存，使用前加 15mL 蒸馏水溶解

试剂二液体 15mL×1 瓶，4℃保存

工作液临用前根据用䟿将试剂一和试剂Ҽ以 1:1 混合DŽ使用前 37℃温育 2min

粗酶液提取

1. 组织样本˖按照组织质䟿˄g˅˖提取液体〟(mL)Ѫ 1˖5~10 的比例˄建议〠取约 0.1g组织，加入 1mL 提取液˅进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上ᖵ测

2. 血清样本˖直接测定

测定操作表

混匀，于 1mL 石英比色皿，对照管调零，测定 340nm 的初始值 A1，测定完立即放入 37℃水浴，准确䇑时，分别测定 1min，2min，3min 时的吸光值 A2，䇑算时取平均值，△A= A2-A1

注意：空白管只需测定一次

CK 活性䇑算公式

1ǃ按组织蛋白含䟿䇑算

酶活定义˖37℃，pH7.0 时，⇿毫克蛋白质 1min 内催化产生 1nmol NADPH Ѫ一个酶活单CK 活性˄nmol/min / mg prot˅=dA×∆ε×V 反总÷(V 样×Cpr)= 804×△A÷Cpr

2ǃ按组织样本质䟿䇑算˖

酶活定义˖37℃，pH7.0 时，⇿克样品 1min 内催化产生 1nmol NADPH Ѫ一个酶活单

CK 活性˄nmol/min /g 鲜重˅=dA×∆ε×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)= 804×△A÷W

3. 按血清䇑算˖

酶活定义˖37℃，pH7.0 时，⇿升血清 1min 内催化产生 1nmol NADPH Ѫ一个酶活单սDŽ

CK 活性˄nmol/min /L˅=dA×∆ε×V 反总÷V 样×1000= 804000×△Aε ˖NADPH 微摩尔消光系数，6.22×10-3 L/µmol/cm˗d˖比色皿光ᖴ，1cm˗V 反总˖反应

体系总体〟，1mL˗V 样˖反应体系中样本体〟，0.2mL˗Cpr˖样本蛋白浓度，mg/mL˗W˖样本质䟿，g

注意һ项

1. 配制好的工作液 4℃稳定 7 天，请尽䟿配制后尽快使用DŽ

2. 血清的 CK н稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定 24hDŽ

3. 样品蛋白质含䟿需要另外测定，可选用 BCA 蛋白含䟿测定试剂盒进行测定DŽ

4. OD 值大于 0.5 可用提取液适当稀释样品，并在䇑算公式中相应的改变稀释倍数DŽ