Hoechst33342染色试剂盒

产品简介：

Hoechst33342 染色液可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链 DNA 染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。

 Hoechst 33342 是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。Hoechst 33342能少许进入正常细胞膜，使其染上低蓝色，而凋亡细胞的膜通透性增强，因此进入凋亡细胞中的 Hoechst 33342 比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体 DNA 的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与 DNA 结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将 Hoechst 33342 排出到细胞外使之在细胞内积累增加

等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。

 Hoechst 33342 的最大激发波长为 346nm，最大发射波长为 460nm；Hoechst 33342 和双链DNA 结合后，最大激发波长为 350nm，最大发射波长为 461nm。

 本 Hoechst 33342 染色液可直接用于活细胞或组织的细胞核染色，也可用于固定细胞或组织的细胞核染色。

产品应用：

1.流式细胞仪

2.激光共聚焦

3.荧光显微镜

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.染色后立即进行分析。

4.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。

5.本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。

6.根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法，只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。

7.活细胞原位染色可能需要较长时间，可将染液加入培养基后避光孵育 1-2 小时，或更长时间。

8.以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例，细胞染色不需要固定，也可以固定后染色，其他方法请参阅相关资料。

1、 染色工作液的配制：

根据样品数用 PBS 将 HO33342 染色液 10-100 倍稀释，配制成染色工作液。

2、 细胞涂片的制备：

贴壁细胞，可将盖玻片放于培养器皿中，让培养细胞长于玻片上，然后用药物诱导细胞凋亡后取出，用 4%多聚甲醛固定 5min。也可其他方式培养后收集细胞制作涂片检测。对于悬浮细胞，用药物诱导细胞凋亡后，500-1000g 离心 5 分钟收集细胞，用 PBS 洗 2 次，收集调整细胞数为 1X105/ml，涂片或用离心涂片，用 4%多聚甲醛固定 5min；

3、 用 PBS 洗涤涂片两次。

4、 加适量染色工作液于涂片上，室温避光染色 5-20 分钟。

5、 用纯水 10 倍稀释的试剂 B 洗涤涂片。

6、 用荧光显微镜检测结果。染料-DNA 复合物的最大激发波长为 350nm，最大发射波长为 461nm。

结果分析 ：

置于荧光显微镜下，选用 340-350nm 的激发光观察：

在荧光显微镜下，活细胞呈弥散均匀蓝色荧光，凋亡细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状蓝色荧光。

如果见到 3 个或 3 个以上的 DNA 荧光碎片被认为是凋亡细胞。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。