MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒

产品简介：

MTT 法细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。活细胞的线粒体中存在与 NADP 相关的脱氢酶，可将黄色的 MTT 还原生成结晶状的蓝紫色的 Formazan，死细胞无此酶，MTT 不被还原。在特定溶剂存在的情况下，Formazan 可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定 460-630nm 波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

 本试剂盒灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

 可以为您提供各种颜色的M 系列、N 系列、L 系列、E 系列、G 系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。

产品应用：

酶标仪

使用方法：

1.需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

2.还原的 MTT 在 460-630 均有较好的吸收，如果你的酶标仪是滤光片，可以选 470 nm 左右或 630 nm 左右的滤光片，如果酶标仪有单波长，你可以在检测前扫描一下吸收谱，选用最大吸收波长检测，最大波长，在550nm 附近，必要时加一个参比波长以扣除非特异性吸收。

3.MTT 溶液为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。

4.Formazan 溶解液结冻或产生沉淀时可以 37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。

5.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

贴壁细胞：

1. 收集对数期细胞，每孔加入 100ul 细胞悬液,使待测细胞调密度约 2000-10000 孔。

2. 5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96 孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，也可两小时，或半天时间后加药，一般 5-7 个梯度,每孔 100ul,设 3-5 个复孔。

3. 5%CO2，37℃孵育 16-48 小时，倒置显微镜下观察。

4. 每孔加入 10ulMTT 溶液，继续培养 4h。若药物与 MTT 能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用 PBS 冲2-3 遍后，再加入含 MTT 的培养液。

5. 终止培养，小心吸去孔内培养液。

6. 每孔加入 150ul 溶解液，置摇床上低速振荡 10min，使结晶物充分溶解。在酶标仪 490nm 或 550nm 或570nm 处测量各孔的吸光值。

7. 同时设置调零孔（培养基、MTT、溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、溶解液） 

悬浮细胞：

1. 收集对数期细胞，调节细胞悬液浓度 1×106/ml，按次序将补足的无血清培养基 40ul、需检测药物 10ul、细胞悬液 50ul（即 5×104 细胞/孔），共 100ul 加入到 96 孔板（边缘孔用无菌水或 PBS 填充）。每板设对照（加 100l 培养基）。

2. 置 37℃，5%CO2 孵育 16-48 小时，倒置显微镜下观察。

3. 每孔加入 10 ul MTT 溶液，继续培养 4 h。

4. 离心（1000 转 x10min），小心吸掉上清，每孔加入 100 ul 溶解液，置摇床上低速振荡 10 min，使结晶物充分溶解。490nm 或 550nm 或 570nm 处测量各孔的吸光值。

5. 同时设置调零孔（培养基、MTT、溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、溶解液），每组设定 3-5 复孔。 

结果分析 ：

细胞的存活率：将各测试孔的 OD 值减去调零孔 OD 值或对照孔 OD 值。各重复孔的 OD 值取均数±SD。 

细胞的存活率以 T/C%表示，T 为加药细胞的 OD 值，C 为对照细胞的 OD 值。

细胞存活率% =（加药细胞 OD/对照细胞 OD）×100

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。