细胞内pH值检测试剂盒（红色荧光）

产品简介：

细胞内 pH（Intracellular pH，pHi）是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素，所有蛋白质都依赖于严格调节的 pH 值以维持其结构和功能。质子 - 去质子化可以指示生物表面的电荷，并且是许多代谢反应中的组成部分。此外，跨线粒体膜的质子梯度用于产生细胞能量并支持其他线粒体过程。因此，细胞已经开发出多种机制来保持 pHi 的窄范围，以响应 pH 值的细胞内和细胞外波动。

 细胞内 pH 值检测试剂盒采用P06 细胞内 pH 值荧光探针检测胞内 pH 值的变化。P06 是 pH 敏感的荧光染料，其在碱性条件下荧光强更高，反之酸性条件下变低，从而 P06 可被用于监测细胞内 pH 变化，见图一。

P06 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，P06 本身没有荧光，穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成荧光物质，从而被滞留在细胞内。产生的荧光物质最大激发波长为 488nm，最大发射波长为 640nm，其在不同的 pH 值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映细胞内 pH 值得变化情况。

 P06 主要用于哺乳动物细胞的研究，也可用于其他动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内 pH 水平检测。在有细胞内 pH 变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为 488-530nm左右，发射波长为 640nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内 pH 值的变化。

 本试剂盒内 P06 探针母液 500-5000 倍稀释后使用，一般 1000-2000 倍稀释使用即可，按每个样 500 μl 计算，50μl 母液至少可以做 100-200 个样品。

 本试剂盒主要用于细胞内 pH 值变化的定性检测。如果需要测定细胞内 pH 值数值。

 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

产品应用：

流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。

2.pH 探针为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.P06 探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。

4.吸取 P06 探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。

5.未使用完的 P06 探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

6.P06 探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。

7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

8.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

9.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

10.染色后立即进行分析。

11.可以在染色溶液中加入等体积的 20% Pluronic F127 溶液，Pluronic F127 可以帮助 P06 更快进入细胞，不建议在 Pluronic F127 中长期保存P06 溶液。

12.本试剂盒主要用于细胞内 pH 值变化的定性检测。如果需要测定细胞内 pH 值数值。

1. 染色工作液的配制：

根据样品数，用探针稀释液将 P06 探针进行 10 倍稀释， 然后再用 HBSS 缓冲液稀释 P06 溶液20 倍-200 倍，配制成 P06 染色工作液。

2. 将 P06 染色工作液加入已处理好的细胞，在 37℃孵育 30-60 分钟。

3. 用 PBS 或 HBSS 洗涤细胞 2-3 次。用 HBSS 重悬细胞。

4. 然后用该细胞进行荧光细胞内 pH 变化情况检测。

激发波长 488-530nm，发射波长 640nm。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。