溶酶体pH值检测试剂盒（绿色荧光）

产品简介：

溶酶体 pH（Intracellular pH，pHi）是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素，所有蛋白质都依赖于严格调节的 pH 值以维持其结构和功能。质子 - 去质子化可以指示生物表面的电荷，并且是许多代谢反应中的组成部分。细胞已经开发出多种机制来保持 pHi 的窄范围，以响应 pH 值的细胞内和细胞外波动。

 溶酶体 pH 值检测试剂盒采用 P02 溶酶体 pH 值荧光探针检测溶酶体 pH 值的变化。P02 是 pH 敏感的荧光染料，在采用黄绿色发射光检测时，其荧光强度随着 pH 值降低而增强，反之碱性条件下变低，从而P02 可被用于监测溶酶体 pH 变化，见图一。

市面上现有的 pH 探针不适用于研究酸性细胞器如溶酶体，内涵体，精子和顶体，因为它们的荧光在较低 pH 下显著降低。另外，市面上现有的 pH 探针不能选择性地定位于酸性细胞器中。P02 是研发的适合溶酶体 pH 检测的荧光探针，它是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，是一种嗜酸性的荧光染料，它在较低的 pH 下发出强烈的黄绿色荧光。P02 进入细胞后，会产生特异性的溶酶体聚集。产生的荧光物质最大激发波长为 385nm，最大发射波长为 540nm，其在不同的 pH 值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映溶酶体 pH 值的变化情况。

 P02 主要用于哺乳动物细胞的研究。在有溶酶体 pH 变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为 380-405nm 左右，发射波长为 525～550nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测溶酶体 pH 值的变化。

产品应用：

流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。

2.pH 探针为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.P02 探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。

4.吸取 P02 探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。

5.未使用完的 P02 探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

6.P02 探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。

7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

8.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

9.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

10.染色后立即进行分析。

11.可以在染色溶液中加入等体积的 20% Pluronic F127 溶液，Pluronic F127 可以帮助 P02 更快进入细胞，不建议在 Pluronic F127 中长期保存 P02 溶液。

12.本试剂盒主要用于溶酶体 pH 值变化的定性检测。但是在一定 pH 值范围内荧光强度与溶酶体 pH 有良好的线性关系，从而可以换算出溶酶体的 pH 值的具体数据。如果需要制备标准曲线换算溶酶体 pH 值数值。

1. 染色工作液的配制：

根据样品数，用探针稀释液将 P02 探针进行 10 倍稀释， 然后再用 HBSS 缓冲液稀释 P02 溶液50 倍-100 倍，配制成 P02 染色工作液。

2. 将 P02 染色工作液加入已处理好的细胞，在 37℃孵育 1-5 分钟。

3. 然后用该细胞进行荧光溶酶体 pH 变化情况检测。

激发波长 360-405nm，发射波长 525-550nm。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。