细胞内pH值检测试剂盒（定量全套）（绿色荧光）

产品简介：

细胞内 pH（Intracellular pH，pHi）是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素，所有蛋白质都依赖于严格调节的 pH 值以维持其结构和功能。质子 - 去质子化可以指示生物表面的电荷，并且是许多代谢反应中的组成部分。此外，跨线粒体膜的质子梯度用于产生细胞能量并支持其他线粒体过程。因此，细胞已经开发出多种机制来保持 pHi 的窄范围，以响应 pH 值的细胞内和细胞外波动。

 细胞内 pH 值检测试剂盒采用 P01 细胞内 pH 值荧光探针检测胞内 pH 值的变化。P01 是 pH 敏感的荧光染料，其在碱性条件下荧光强更高，反之酸性条件下变低，从而 P01 可被用于监测细胞内 pH 变化，见图一。

 P01 是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，P01 本身没有荧光，穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成荧光物质，从而被滞留在细胞内。产生的荧光物质最大激发波长为 502 nm，最大发射波长为 528 nm，其在不同的 pH 值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映细胞内 pH 值得变化情况。

 P01 主要用于哺乳动物细胞的研究，也可用于其他动物组织、植物细胞、酵母等的细胞内 pH 水平检测。在有细胞内 pH 变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为 488 nm 左右，发射波长为 525～540 nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内 pH 值的变化。

 本试剂盒内 P01 探针母液 500-5000 倍稀释后使用，一般 1000-2000 倍稀释使用即可，按每个样 500 μl 计算，50 μl 母液至少可以做 100-200 个样品。

 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。

产品应用：

流式细胞仪//激光共聚焦/荧光显微镜

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使 DMSO 溶液集中于管底。

2.pH 探针为 DMSO 溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

3.P01 探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。

4.吸取 P01 探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。

5.未使用完的 P01 探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。

6.P01 探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。

7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

8.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

9.荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

10.染色后立即进行分析。

11.可以在染色溶液中加入等体积的 20% Pluronic F127 溶液，Pluronic F127 可以帮助 P01 更快进入细胞，不建议在 Pluronic F127 中长期保存 P01 溶液。

12.本试剂盒主要用于细胞内 pH 值变化的定性检测。但是在一定 pH 值范围内荧光强度与细胞内 pH 有良好的线性关系，据此可以用特定的 pH 值的标准缓冲液制备标准曲线，从而可以换算出细胞内的 pH 值的具体数据。如果需要制备标准曲线换算细胞内 pH 值数值。

1. 染色工作液的配制：

根据样品数，用用 HBSS 缓冲液将 P01 探针稀释 P01 溶液 200 倍-1000 倍，配制成P01 染色工作液。

2. 将 P01 染色工作液加入已处理好的细胞，在 37℃孵育 30-60 分钟。

3. 用 PBS 或 HBSS 洗涤细胞 2-3 次。用 HBSS 重悬细胞。

4. 然后用该细胞进行荧光细胞内 pH 变化情况检测。

激发波长 488-506 nm，发射波长 526-536 nm。 

PH 标准曲线的绘制：

1. 样本细胞用 P01 探针染色。

2. 从样本细胞悬液中取 3×106 个/ml 细胞，离心清洗后用适量的 pH 标定缓冲液混合，制成细胞悬液。

3. 加入 nigericin，终浓度 10-50 uM，孵育约 10 分钟后，测定荧光强度。激发波长 440 nm 和 488 nm，发射波长 526-536 nm。

4. 以缓冲液的 pH 值为横轴，以 440 nm 激发波长的荧光值 F1 与 488 nm 激发的荧光值 F2 的比值 R=F2/F1 为纵轴作图，绘制标准曲线。

5. 根据标准曲线计算待测样本细胞的 pH 值。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。