细菌耗氧率检测试剂盒

产品简介：

细菌氧气消耗检测试剂盒（Oxygen Consumption Rate Assay Kit）是利用合成的特异性氧气荧光探针R11 来检测细胞外耗氧情况变化的试剂盒。可以通过简单的混合基于荧光酶标仪便捷的直接进行耗氧量测定。

 耗氧量分析是研究代谢的有用工具。耗氧量测量结果是细胞代谢功能的关键性指示。通过这类指标来探究活细菌细胞代谢，可为细胞功能以及代谢变化在疾病进展中的作用提供深入洞察。

 R11 分析提供了一种基于酶标仪的简单、灵敏的方法，用以测定原核细胞生长或筛选抗菌化合物，无需进行多次样品稀释或基于琼脂的冗长的研究。其还为微生物代谢研究提供了一种有价值的方法。酶标仪形式提供了筛选所需的通量和分辨率，且便于生成IC50 或 MIC 数据。

 R11 耗氧量分析可以实时测量细菌全细胞的耗氧量，是以高通量形式来评估用于代谢表征的细菌细胞呼吸以及评估治疗对细菌功能毒性作用的一种可靠方法。它可以使用荧光酶标仪在标准微孔板上进行有氧代谢的简单动力学测定。随着细菌代谢作用的进行，溶解氧被消耗，样品中的氧气浓度降低，导致 R11 分析的信号增加，从而实现对耗氧量的测定。

 R11 是氧气敏感的荧光探针，最大激发波长为 453 nm，最大发射波长为 592nm。其荧光通过分子碰撞与氧气反应，由 O2 淬灭，在无氧条件下荧光强度更高，反之有氧条 件下 荧光 强度 变低 ，因 此荧 光信 号的 量与 样品 中细 胞外 O2 的量 成反 比， 从而R11 可被用于监测细胞外氧气消耗的变化。在测定中，耗氧率由荧光信号随时间的变化计算。细胞耗氧量增加，荧光信号的变化率增加；反之，耗氧量减少，荧光信号的变化率降低。

 R11 与 O2 的这种反应是非破坏性且完全可逆的，R11 没有细胞毒性，其是化学稳定的，惰性的，水溶性的和细胞不渗透的，不能透过完整的细胞膜。因此还可以同时与细菌 ROS、细胞 ATP 、LDH 或其它指标等检测的试剂结合使用，进行多参数检测。

 用R11 进行细胞外耗氧检测方法及其简单，不需要适用特殊的仪器设备，只需要荧光酶标仪之类的荧光读板设备即可。

 R11 采用可见光激发检测，相对于采用紫外光激发的检测试剂，细胞损伤更低，对细胞的毒害更小。结果更加准确客观。

 细菌细胞氧气消耗检测试剂盒可以用于直接，实时分析细胞耗氧代谢功能。本试剂盒可以用来测量各种全细胞，透化细胞，各种 3D 培养物，支架和基质等。R11 还适用于分离的酶，酵母和霉菌等的细胞外耗氧情况测量。

 以 96 孔细胞培养板计，本试剂盒小包装可以检测 200-400 个样本。

 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内 pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。

产品应用：

线粒体功能和细胞代谢研究

产品特点：

1.广泛适用于各种体外模型；不再局限于单层细胞，还能测定悬浮细胞、微生物和特定的 3D培养物；

2.简单的“混合-检测”方案允许使用多种其他分析试剂盒进行多参数分析；

3.可逆转，能够观察耗氧量的瞬态和长时间变化；

4.可适配多数荧光酶标仪以及标准 96 孔和 384 孔；

5.以高通量的形式方便地测量；

6.无需等待专用设备空闲所需的实验室时间，也无需大额资金专用设备投入。

使用方法：

1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

3.以下操作以 96 孔细胞培养板为例。其他培养容器或装置请根据实际情况调整试剂用量和检测方法。各试剂等比例调整即可。O2 荧光探针终浓度 16 倍稀释最佳。

4.R11 探针的信号变化直接取决于所测量细胞类型的细胞呼吸速率，建议尽可能使用每孔高的细胞密度作为起点，并根据需要减少细胞数量。 

5.并非所有细胞类型都消耗足够用于检测的氧气。

6.最好使用荧光培养专用的透明底黑色培养板。实在没有的话可以采用透明板，注意细胞孔间隔开，减少检测时各孔之间的光互相干扰。

7.用于测定的所有仪器试剂溶液耗材均需 37℃预热。

8.添加氧气封闭液时注意避免产生气泡。

9.尽可能使用多通道移液器添加试剂。

关于仪器设置：

温度对检测有较大影响。有条件的话，务必使用配有温度控制的酶标仪。

常规的荧光信号强度测量，使用基于单色仪或基于过滤器的酶标仪，最佳激发波长使用 450-460 nm，发射波长使用 586-600 nm。可根据实际机器和样本选择信号最强的波长。

具有检测增益参数（PMT，Parameters）的通常设置为中或高。

一般使用底部读数 bottom read。

关于氧气封闭液使用：

氧气封闭液可以用移液器吸取添加，添加时需要沿着培养板壁慢慢加入，使其顺板壁向下流到培养基表面。

也可以直接用滴瓶滴加，倒转预热的滴管瓶并轻轻施加压力，使封闭液足以充注瓶尖。 每个孔滴两滴，使每个液滴在孔侧面顺应向下流到培养基表面。

使用移液器添加封闭液时，可将黄色吸头的嘴部用锋利的刀片或剪刀修剪处理。将竖直吸头离尖端 3-4 mm处 45°角修剪处理。

取下滴管瓶内嘴盖，轻轻吸取预热的氧气封闭液。避免上下吹吸形成气泡。

关于细胞培养：

在检测当天在 100 μL 培养基中接种。

注意所需的接种密度取决于细胞类型。 我们推荐进行细胞接种密度预实验以确定最佳密度。通常从高细胞密度（通常为 100,000）开始，每孔的最佳细胞数一般为：每孔 5-10 x 105（96 孔板）。

不同细菌细胞类型的需要的细胞数量差异极大。

检测待测样品都设置 3 复孔。

注意始终在每个 96 孔板上留出至少 6 个孔，以免添加细胞作为空白对照和信号控制孔。

关于对照孔设置：

一般空白孔要设置，其它对照根据实验需要决定。

（推荐对照设置，以下可选，非必须）：

操作步骤：

1. 准备细胞模型。

2. 培养好的待检测细胞移除培养基，用 PBS 洗涤细胞。

3. 加入 100 μl 新鲜培养基。

4. 加入 4 μl R11 氧荧光探针，充分混匀。

5. （可选）可以在此处添加待测试化合物（通常为 1-10 μL）（如果需要的话）。

6. 每孔加入 100 μl 氧气封闭液。

7. 然后用该细胞板进行荧光细胞外 O2 消耗变化情况检测。

激发波长 455 nm，发射波长 592 nm。每 3 分钟读取一次。

8. 绘制耗氧率曲线。

9. 计算每个样品的斜率值。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。