BCA 蛋白定量试剂盒

产品简介：

BCA 法蛋白定量试剂盒检测原理是，在碱性条件下，蛋白质将 Cu2+还原为 Cu+， Cu+与 BCA 试剂相互作用，两分子的 BCA 螯合一个铜离子，形成紫颜色的络合物，该复合物为水溶性，其在 562nm 处有强吸光性，在一定浓度范围内，吸光度与蛋白质含量呈良好的线性关系。

 通过测定 562nm 的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。

 BCA 法是目前实验室应用最广泛的蛋白质浓度测定方法，BCA 法快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。

 BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中 ， 常 用 浓 度 的 去 垢 剂 SDS ， Triton X-100 ， Tween 不 影 响 检 测 结 果 ， 但 受 螯 合 剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。

 本试剂盒采用牛血清白蛋白（BSA）溶液作为蛋白质标准品溶液。

 本试剂盒最小检测蛋白量可达 0.2μg，检测浓度下限达到 10μg/mL。

 本试剂盒测定范围为 20～2000 μg/ml，在此范围内有较好的线性。如需检测 10ug/ml-200ug/ml 的低浓度蛋白样品，可以选用微量 BCA 蛋白定量试剂盒。如需检测 BCA 法背景值较高而不适合 BCA 法的样品，可以选用 Bradford 蛋白定量试剂盒。

 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。

产品应用：

蛋白定量

使用方法：

在低温条件或长期保存导致 BCA 试剂出现沉淀时，可搅拌或 37℃温育使溶解。如发现细菌污染则应丢弃，避免对实验结果造成影响。

试剂配制：

1. BCA 工作液配制：

根据样品数量，按 50 体积 BCA 试剂 A 加 1 体积 BCA 试剂 B（50:1）配制适量 BCA 工作液，充分混匀。例如5ml BCA 试剂 A 加 100μl BCA 试剂 B，混匀，配制成 5.1ml BCA 工作液。

总 BCA 工作液体积=（标准品+待测样品）×每个样品所需要的 BCA 工作液×重复数

2. 蛋白标准工作液配制：

根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用纯水 5 倍稀释，配成

蛋白检测：

96 孔微孔板测定：

1. 标准曲线绘制。

取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：

2. 按上表数据在作好标记的 96 孔板微孔中稀释好蛋白标准品并充分混匀。

3. 样品检测。分别在作好标记的其它待测孔加好 20ul 待测蛋白样品（原液或稀释液）。

4. 在标准曲线孔和待测样品孔分别每孔加入 200ul BCA 工作液。充分混匀。

5. 盖上 96 孔板盖，37℃放置 30 分钟。

6. 在 5 分钟内完成酶标仪检测。

7. 用酶标仪测定 A562，以不含 BSA 的光吸收值（0 号孔）为空白对照。

8. 以蛋白含量（g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

9. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得待测样品的蛋白含量。

10. 计算蛋白浓度：

以查得的蛋白含量除以样品体积 20l，再乘以样品检测前相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。

比色皿测定

1. 标准曲线绘制。

在比色皿/试管中，按以下表格数据加入试剂：

2. 按上表数据在作好标记的比色皿中稀释好蛋白标准品并充分混匀。

3. 样品检测。分别在作好标记的其它待测比色皿中加好 100ul 待测蛋白样品（原液或稀释液）。

4. 在标准曲线孔和待测样品孔分别每孔加入 2ml BCA 工作液。充分混匀。

5. 37℃放置 30 分钟。

6. 在 5 分钟内完成分光光度计检测。

7. 以不含 BSA 的光吸收值（0 号孔）为空白对照，用分光光度计测定 A562。

8. 以蛋白含量（g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

9. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得待测样品的蛋白含量。

10. 计算蛋白浓度：

以查得的蛋白含量除以样品体积 100l，再乘以样品检测前相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。

常见问题分析：

1.是否每次测定时都需要做标准曲线？

建议每次测定时都做标准曲线。因为 BCA 法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

2.测定时发现随着浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。

可能的原因是样品中含有严重干扰 BCA 法测定蛋白浓度的物质，请参考详细的 BCA 法的兼容性列表。

3.待测样品一定需要稀释吗？

不一定。对于样本来说，需不需要稀释取决于样本的检测值是否落在标准曲线范围内，如果样本浓度超过试剂盒的最高的检测限，那么样本是需要稀释后检测的。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。