外泌体蛋白提取试剂盒

产品简介：

外泌体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种方法得到的外泌体样品中提取总蛋白。

 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解外泌体膜组份，本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

 本试剂盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

 本试剂盒中不含有 EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于 2D 电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于 2D 电泳，用脱盐柱脱盐处理。

 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。

 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。

 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于 Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down 实验的试剂盒等总计 300 多种蛋白提取试剂盒供选择使用。

产品应用：

外泌体研究

使用方法：

1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2.蛋白酶抑制剂在 2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

3.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

4.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

5.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

6.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

7.下游实验如果是进行特定蛋白酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

1. 提取液准备：

每 500ul 冷的蛋白提取液中加入 2ul 蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2. 每 50ul 外泌体样品中加入 50ul 冷的蛋白提取液，吹打混匀后，在 4℃条件下振荡 20-30 分钟。

3. 在 4℃，12000×g 条件下离心 10 分钟。

4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到外泌体总蛋白。

5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

常见问题分析：

1.蛋白浓度低？

外泌体蛋白含量较少，需要较多的外泌体样本才能得到足够的蛋白样品用于下游实验。在条件允许的情况下，尽可能加大外泌体提取时的培养基上清、血清、体液等样本的上样量。

不同细胞培养上清提取得到的外泌体蛋白量差异较大，大多数细胞的参考值为 0.1ug 蛋白/106 细胞。

处理部分外泌体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂 A 的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

2.用什么方法定量蛋白？

建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法，因为试剂 A 中含有干扰 Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用 Bradford 法定量。

3.提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

4.外泌体 WB 标志蛋白用什么？

在进行 WB 检测时，通常检测外泌体标志蛋白为 CD63 、CD9 、CD81 、TSG101 、ALIX、HSP70 等。

5.进行外泌体 WB 鉴定时有什么内参蛋白可供选择？

没有，该检测属于定性检测。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。