γ-氨基丁酸(GABA)测试盒
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
γ-氨基丁酸(GABA)是一种天然活性成分,广泛分布于动植物体内。γ-氨基丁酸是中枢神经系统中有效的抑制性神经递质,具有降血压、增进脑活力、营养神经细胞、保持神经安定、促进生长激素分泌和保肝利肾等作用,目前在医药和保健食品中已有广泛的应用。
测定原理:
苯酚和次氯酸钠与 GABA 反应,产生蓝绿色产物,在 640nm 有最大吸光值。
需自备的仪器和用品:
分光光度计、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制:
提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存;
试剂三:液体 10mL×1 瓶,4℃保存;
试剂四:液体 35mL×1 瓶,4℃保存。
样品测定的准备:
称取约 0.1g 样本,加入 1mL 提取液,充分匀浆,转移至 EP 管,95℃水浴 2h(盖紧,以防止水分散失)。冷却后 8000g ,25℃离心 10min,取上清待测。
测定步骤
EP 管中加入如下试剂
混匀,取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿,测定 640nm 下吸光值 A 测定与 A 空白,ΔA=A 测定-A空白,空白管只需测一管。
GAD 活力计算:
标准条件下测定回归方程为 y = 0.053x - 0.0163,R2 = 0.9953;x 为标准品浓度(μmol/mL),y 为吸光值。
1、按照蛋白浓度计算
GABA(μmol/mg prot)=(ΔA+0.0163)÷0.053÷Cpr=18.87×(ΔA+0.0163)÷Cpr
2、按样本鲜重计算
GABA 活力(μmol/g 鲜重)=(ΔA+0.0163)÷0.053÷W=18.87×(ΔA+0.0163)÷WCpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g。