乙酸含量检测试剂盒（高效液相色谱法 HPLC） 

货   号：   BES-2625BTK 

规   格：   50T/48S 

有效期：   6个月 

储存条件：2-8℃

产品简介： 

乙酸，也叫醋酸、冰醋酸，化学式CH3COOH，是一种有机一元酸，为食醋内酸味及刺激 性气味的来源。 乙酸在210 nm下有吸收峰，可以利用高效液相色谱法测定其含量。 

试验中所需的仪器和试剂： 高效液相色谱仪(Polaris C18-A色谱柱(4.6×250 mm)，紫外检测器(VWD))、台式离心机、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP管(2 mL)、针头式过滤器（水系），注射器，抽滤器，滤膜(水 系、有机系)，棕色进样瓶(50个，1.5 mL)、超纯水。 

产品内容： 

提取液：液体80mL ×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体2 mL ×1瓶, 4℃保存。 

试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存。 

标准品：1 mL×1支，4℃保存，8.75 mmol/mL乙酸标准品。 

实验前准备工作： 

1、将一瓶试剂二溶解到1000ml超纯水中，再加入0.9ml的试剂一，混匀，得到流动相A。 

2、将1000ml配置好的流动相A用滤膜抽滤，（配置好的流动相A采用0.22um水系滤膜抽滤）。 

3、将抽滤好的流动相A超声20min，除去气泡。

4、标准品的配置：将8.75mmol/ml的乙酸标准溶液用蒸馏水稀释成175umol/ml、 87.5umol/ml、17.5umol/ml、8.75umol/ml、1.75umol/ml、0.875umol/ml的乙酸标准溶液。 （配置的标准品浓度仅供参考，客根据实际样品浓度进行调整）。4℃避光保存（密封）， 测试前采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内，待测。 

操作步骤：

1、乙酸的提取： 按质量（g）提取液体积（ml）1:5~10比例，建议称取0.15g新鲜样本，充分研磨碾碎，加入 1ml提取液，密封，混合均匀，置于75℃水浴锅中浸取20min。混合两次提取的提取液， 12000rpm离心10min，取上清液，测试前采用水系针头式过滤器过滤到棕色进样瓶内，待 测（若上清液颜色过深或者浓度过高，可稀释后再次过滤待测）。 

2、测定步骤： 1、开启电脑，打开液相色谱仪各模块开关按钮，安装上色谱柱，打开软件，在方法组中设 置进样量为10ul，柱温：30℃，流速为0.4ml/min，波长为210nm，走样时间25min，设置完 毕保存方法组。 2、采用相应的流动相清洗柱子，用流动相A平衡柱子，待基线稳定后开始家样。 3、检测待测的标准贫农溶液，进样量为10ul，在25min内可分离出乙酸，乙酸的保存时间为 13min左右（体系、柱子、流动相PH、温度等不同，保留时间有差异，仅作为参考）。 4、检测待测的样品溶液，进样量为10ul，在相应的保留时间处检测乙酸的峰面积。 

3、乙酸含量计算： 以标准品浓度（umol/ml）为横坐标，峰面积为纵坐标绘制乙酸的标准曲线，将样本的峰面 积带入标准曲线，计算样本中乙酸的浓度x（umol/ml）。 乙酸的含量（umol/ml）=X×V提取÷W=1.5×X÷W V提取：提取液的体积，1.5ml；W：样本质量，g。稀释后测试的样本，需要乘以相应的稀 释倍数，再进行计算。 

注意事项：

1、测试完毕之后，需要用高浓度的超纯水相冲洗色谱柱（约20-30个柱体积），以防阻塞 色谱柱，再用高浓度的有机相冲洗色谱柱，最后按柱子的种类规范冲洗，防止损伤色谱柱。 

2、标准品的稀释倍数要根据样本中乙酸的浓度确定，样品中乙酸的峰面积必须在不同浓度 的标准品溶液的峰面积之内，该标准品的稀释倍数只是一个参考。若样本中乙酸浓度过高， 建议可稀释后再测。 

3、若样本量过大，建议每天测试一次标准溶液（一个标准溶液即可），以确定相应的保留 时间，所有待测溶液测试前须放置室温状态