植物原花青素测试盒

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

原花青素（Oligomeric Proantho Cyanidins，OPC）是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物，广泛存在于植物的各种器官中，具有极强的抗氧化性和清除自由基的作用，广泛的应用于医药，食品，化妆品，保健品行业。

测定原理:

在酸性条件下，植物原花青素 A 环上的间苯二酚和间苯三酚与香草醛发生缩合反应，产生有色化合物，在 500nm 处有特征吸收峰，测定 500nm 光吸收值，可计算植物中原花青素的含量。

自备实验用品及仪器:

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水、盐酸、无水乙醇和甲醇。

试剂组成和配制:

提取液：60%乙醇，自备，4℃保存。（60mL 无水乙醇溶于 40mL 蒸馏水）

试剂一：8%盐酸 10mL，自备，4℃保存。（800μL 盐酸溶于 9.2mL 甲醇）

试剂二：粉剂 0.05g×1 瓶，4℃避光保存，临用前加 5mL 甲醇溶解。

测定工作液：临用前按照用量将试剂一和试剂二按照 1:1 混合。

空白工作液：临用前按照用量将试剂一和甲醇按照 1:1 混合。

OPC 提取:称取约 0.1g 样本，加入 2mL 提取液，匀浆后，60℃振荡提取 2h，10000g，25℃，离心 10min，取上清待测。

测定操作表:

1、 分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。

2、 操作表

OPC 计算公式:

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0194x+0.0006，R2=0.999

OPC 含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0194×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3 = 0.515×(ΔA-0.0006）÷WV 样总：加入提取液体积，2mL； V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；W：样品质量，g

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.0097x+0.0006，R2=0.999

OPC 含量（mg/g 鲜重）= (ΔA-0.0006）÷0.0097×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)×10-3= 1.03×(ΔA-0.0006）÷W

V 样总：加入提取液体积，2mL； V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应中样品体积，0.04mL；W：样品质量，g

注意事项：

1、配制好的试剂二应尽快使用，4℃保存时间不超过一个月。

2、吸光度变化应该控制在 0.01～0.8 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。

3、最低检出限为 10μg/g。