总磺胺类（SAr）酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。   

1 使用目的：

本试剂盒用于土壤、风干粪肥，饲料、鱼、虾和肉类组织（如鸡、牛肉和猪肉），蜂蜜，血清和尿样中总磺胺类（SAr）残留的定量检测。

2.实验原理

博尔森试剂盒采用竞争ELISA方法，在微孔板包被有总磺胺类（SAr）偶联抗原，加入总磺胺类（SAr）标准品或样品，游离总磺胺类（SAr）与微孔条上预包被的总磺胺类（SAr）偶联抗原互相竞争抗总磺胺类（SAr）抗体酶标记物，用TMB底物显色，加入终止液后颜色由蓝色变为黄色，用酶标仪在450nm波长下进行检测，吸光值与样品中总磺胺类（SAr）含量成反比，通过标准曲线计算样品中总磺胺类（SAr）的含量。  

3.试剂盒组成

1 预包被的总磺胺类（SAr）偶联抗原的可拆酶标板：1块（12孔×8条）。
2 总磺胺类（SAr）标准品：6瓶（1ml/瓶），含量分别是： 0 ppb，0.1 ppb,0.3 ppb,0.9 ppb,2.7 ppb,8.1 ppb。
3抗总磺胺类（SAr）抗体酶结合物：1瓶（6ml）。
4显色液A：1瓶（6ml）。
5显色液B：1瓶（6ml）。
6终止液：1瓶（6ml），2M硫酸。
7样本稀释液：1瓶（10×,  6ml），用于样品稀释用。
8浓缩洗涤液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。
9说明书一份。

4 注意事项
1 使用试剂盒前请仔细阅读说明书。
2 不要使用过期试剂盒。
3 试剂盒使用前，将试剂恢复至室温（25±2℃），建议至少回温2小时。
4 标准品中含有总磺胺类（SAr），使用时应特别注意，操作时应带手套。
5 终止液中含有硫酸，使用时防止灼伤皮肤及腐蚀衣物。
6 不同标准品、样品所用吸头不能混用，否则会影响试验结果。
7 不同批号试剂盒中的试剂不得混用；不同标准品、样品所用吸头不得混用，否则会影响实验结果。
8 稀释样本时必须用本试剂盒中的样本稀释液，否则会影响实验结果
9 混合试剂时应避免起泡。

5 酶免分析步骤
1 实验须知
实验开始前请将所有试剂于盒外充分恢复至室温（25±2℃），时间约2小时。回温至室温（25±2℃）后再取出微孔条，多余的微孔条重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保证回温充分，否则影响检测的精确度和准确度。
2.使用后请立即将试剂放回2~8℃保存
3 请不要改变分析程序
4 请使用精确的微量移液器
5 操作一旦开始，请不要中断任何程序
6 ELISA结果的可重复性极大程度的取决于操作程序，请严格按照要求操作
7 为避免交叉污染，每个标准品和样品均应使用不同的吸头加样
8 加样时请勿让吸头接触微孔中的溶液或内表面
2 分析步骤
1 预先进行编号，标记B0、标准品和样品的位置，推荐进行双孔检测
2 取所需数量的微孔（微孔条可拆），将多余板条重新密封并立即放回2~8℃保存
3 样品稀释液（10×）、浓缩洗涤液（20×）稀释成工作液(蒸馏水或去离子水稀释)
4 在B0孔中加入50µl  0.0 ppb标准品溶液
5 在各标准孔中加入50μl的标准品溶液
6 在各样品孔中加入50µl样品溶液
7 在所有孔中加入50µl的总磺胺类（SAr）抗体酶结合物
8 轻轻晃动反应板几秒钟。
9 37℃温浴30min （温浴过程中不时轻拍反应板，可以减少双孔误差）
10 甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
4 反应
1 洗涤程序完成后，立即用微量移液器在每个微孔中先加入50µl显色液A，再加 50µl显色液B；轻微晃动反应板使之彻底混匀
2 37℃温浴10min
3 每孔中加入50µl终止液，混匀
4 在450nm下检测吸光度，结果在5min内读取。