FM4-64产品说明书

货号：BES22353KB

规格：1mg（粉末）

贮存条件: -20°C避 光保存

溶解性: 甲醇溶解

配置方法建议:

1.将原产品管5000rmp离心lmin;

2.将164.6uL的甲醇加入到原产品管中，吹打溶解后，即得10mM的储存液;

3.将储存液于-20°C避光保存。

产品参数:

Abs/Em (in MeOH): 543/- nm, (emission in MeOH is too weak to measure)

Abs/Em (in membranes): 510/750 nm

分子式: C30H45Br2N3

分子量: 607.51

产品说明:

FM4-64具有亲脂性尾部(两个碳链)和带阳离子的高亲水性头部，具有三个双键。阳离子苯乙烯基染料是通过活性依赖性染色突触小泡来发挥功能。染料与细胞或组织共孵育时，染料的水相部分没有荧光，而染料的亲脂性尾部插入细胞膜并呈现强荧光。神经刺激后，在进行胞吞作用时，染料被包裹在囊泡内，因此，洗去细胞表面附着的染料后，荧光信号强弱表示新形成的囊泡的数量的多少。反之，在胞吐作用时，染料与神经递质一起从囊泡释放，导致荧光信号减少。因此，荧光强度的变化反映了胞吞/胞吐或突触活动的情况。内吞过程中荧光增加的速率一“结合速率”和胞吐过程中荧光减少的速率一“解离速率”因染料种类而异。通常，具有较长亲脂性尾部和更多双键的染料对膜具有较高的亲和力，因此具有较高的结合速率和较低的解离速率。FM4-64是阳离子型苯乙烯基亲脂性的荧光染料，用于跟踪神经肌肉连接或突触的突触活动;能够选择性地用红色荧光对酵母菌液泡膜进行染色，可用于观察液泡细胞器形态和动力学、研究胞吞途径以及筛选和表征酵母菌胞吞作用突变体。FM4-64染料不能用于固定细胞染色。

实验操作(仅供参考) :

神经末梢染料也可用于标记非神经元细胞类型的内吞囊泡。染色可以在49C进行以选择性标记质膜;在室温或37°C下，染料的内吞通常在10 min内发生。可以使用Tyrode溶液或其它缓冲液，可选择性添加钠离子通道阻断剂河豚毒素(TTX)，其目的是阻断动作电位，防止染色后的突触囊泡释放。用于特定实验的最佳方案需要由实验者摸索。

 以盖玻片上培养的神经元细胞的神经末梢染色为例:

1.在50mMTyrode溶液中稀释神经末梢染料至最终浓度为4μM。在室温下将含有细胞的盖玻片置于该溶液中1 min,使细胞完全浸没。

2.将盖玻片转移至Tyrode+0.5 μM河豚毒素(TTX)溶液中，室温下孵育1 min。

3.室温下，用Tyrode+ 0.5 μuMTTX溶液反复多次洗涤盖玻片。

4.荧光显微镜下拍照观察。

图. FM4-64在脂质体中的吸收和发射光谱。