包涵体蛋白溶解及复性试剂盒 

货号：BES21411KB

规格：50T

保存条件：RT 保存，保质期 1 年。

产品内容：

产品说明：

本产品用 E.coli 作为宿主表达得到的重组蛋白往往会形成包涵 体，其中的重组蛋白质只完成部分折叠，还没形成最后的正确空间结构，所以没 有生物活性，要得到有活性的重组蛋白，还需要后续的溶解和复性（重折叠）处 理。

采用温和法溶解包涵体，释放的包涵体蛋白质不彻底变性，还能保持其部分 折叠的结构，使后续的复性处理效率提高。

本试剂盒足够 100 次小规模（1mL 规模）的蛋白质复性实验。

操作步骤：

一：洗涤包涵体

说明：用常规方法得到的包涵体常常含有去污剂和细胞碎片，因此需要经过充分 的洗涤才能用于本实验。

1. 将 10mg 包涵体沉淀溶解在 5mL 包涵体洗涤液中，超声波处理 8-10 次 或充分吹打混匀。可以适当留取 10-30uL 作为 SDS-PAGE 电泳样品待用。

2. 4℃ 12000 rpm 离心 20 分钟后弃上清。

3. 重复上面的洗涤步骤 3 次，每次留取 10-30uL 作为 SDS-PAGE 电泳样品 待用。

4. 将包涵体沉淀溶解在 1 mL 包涵体洗涤液中，超声波处理 8 -10 次或充分 吹打混匀。

5. 检查包涵体的纯度：将上步得到的包涵体溶液和前几步得到的预留样品 一起用于 SDS-PAGE 电泳，检查每次洗涤去除杂带的情况。

6. 检查包涵体的浓度：用自备的 BCA 蛋白检测试剂盒测试第 4 步得到的 包涵体溶液的蛋白质浓度。

7. 将第 4 步得到的包涵体溶液的蛋白质浓度调到 5-10 mg/mL(如果低于此 范围，则离心后用适量的洗涤液再溶解；如果高于此范围，则用洗涤液稀释)，然 后均分到 10 个 1.5 mL 塑料离心管中，每管 100 uL。

8. 4℃ 12000 rpm 离心 20 分钟后弃上清。

9. 所得沉淀即纯化的待用的包涵体。

二：确定溶解包涵体的最佳条件

1. 标记上步得到的 10 个离心管，并分别加入 10 种包涵体温和溶解液， 每种 1mL。注意：准确记录它们的对应关系。

2. 充分振荡后，室温放置 30 分钟。

3. 450 nm 检测浑浊度并记录下数据。

4. 4℃ 12000 rpm 离心 10 分钟后收集上清，此即包涵体溶解液。

5. 用 0.22 um 注射器式滤膜过滤包涵体溶解液。

6. 280 nm 检测包涵体溶解液的光吸收。

7. 溶解液溶解包涵体能力跟包涵体溶液浊度跟成反比，跟包涵体溶解液中 OD280 数值成正比。根据上面的数据即可确定哪种溶解液对实验中所用包涵体 具有最佳溶解能力，并将在此溶解液中溶解的包涵体溶解液用于下面的复性实 验。大量处理需要从本公司单独大量订购包涵体温和型溶解液 10 种中的 1 种。

三：包涵体蛋白的复性

1. 在 2.5 mL 4℃预冷的、处于轻柔搅拌中的复性缓冲液中，逐滴加入上步得 到的包涵体溶解液。

2. 待所有包涵体溶解液都加完后，将包涵体蛋白复性溶液用孔径为 0.22 um 注射器式滤膜过滤，除去包涵体（直径一般在 0.5-0.8 um）和大的聚合物。

3. 将得到的溶液用于活性检测或离子交换柱层析和分子筛层析。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。

注意事项：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！以实际收货产品说明书为准，网站说明书仅供参考。