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抗坏血酸(AsA)含量测试盒 BES-BK2721B

抗坏血酸(AsA)含量测试盒

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抗坏血酸(AsA)含量测试盒

注意:正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

AsA 又称维生素 c。AsA 是辅酶、自由基清除剂、电子共体/受体和草酸盐与酒石酸盐生物合成的底物等。作为植物细胞中最重要的抗氧化剂,AsA 在保护叶绿体免于氧化损伤起着举足轻重的作用,也是衡量农作物产品品质的重要指标之一。

测定原理:

在乙酸溶液中,抗坏血酸与固蓝盐 B 反应生成黄色的草酰肼–2–羟基丁酰内酯衍生物,在最大吸收波长 420 处测定吸光度。

自备仪器和用品:

研钵、冰、低温离心机、紫外分光光度计、1mL 玻璃比色皿、可调式移液器和蒸馏水。

试剂组成和配制:

提取液:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 4mL×1 瓶,4℃保存。

试剂二:液体 6mL×1 瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×2 瓶(棕色),4℃避光保存。临用前配制,每瓶加入 7 mL 蒸馏水充分溶解,用不完的试剂 4℃下可保存 3 天。

1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液)进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心 20min,取上清置冰上待测。

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);8000g,4℃离心 20min,取上清液置冰上混匀待测。

3. 血清等液体:直接测定。

AsA 测定操作:

1. 分光光度计预热 30 min,调节波长到 420 nm,蒸馏水调零。

2. 在 EP 管中加入下列试剂

2021091901163510534

混匀,25℃静置 20min,吸取 1mL 加入 1mL 玻璃比色皿中,420nm 下测定各管吸光值。ΔA=A测定-A 空白。

注意:空白管只需测定一次。

AsA 含量计算公式:

标准曲线 y = 0.0088x - 0.018 ,R2 = 0.9978

(1). 按蛋白浓度计算

AsA (μg/mg prot) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷(Cpr×V 样)=113.63×(ΔA+0.018)÷Cpr

(2). 按样本质量计算

AsA(μg/g 鲜重) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷(W×V 样÷V 样总)=113.63×(ΔA+0.018)÷W

(3). 按细胞数量计算

AsA(μg/104 cell) =(ΔA+0.018)÷0.0088×V 样÷(细胞数量×V 样÷V 样总)=113.63×(ΔA+0.018)÷细胞数量

(4)按液体体积计算

AsA (μg/mL) =(ΔA+0.018)÷0.0088=113.63×(ΔA+0.018)V 样:加入样品体积,0.2mL;V 样总:加入提取液体积,1.0 mL; Cpr:上清液蛋白质浓度,

mg/mL;W:样品质量(g)。

注意事项:

1. 试剂三现配现用,配制好的 4℃保存,3 天内使用完。


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