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兔Sc5b-9ELISA Kit
产品货号：BES0183K
产品规格：48T/96T
检测原理：
博尔森生物生物生产的ELISA试剂盒采用“夹心法”:将捕获抗体包被于酶标板上，捕获样品及标准品中的靶蛋白，生物素化的检测抗体与靶蛋白结合， SABC复合物与生物素化检测抗体结合，形成免疫复合物，加入TMB显色液后，若反应孔中有靶蛋白则显蓝色，加入终止液变黄色，检测过程中游离的成分均被洗去，用酶标仪在450 nm处测OD值，靶蛋白浓度与OD值之间呈正比，通过绘制标准曲线计算出标本中靶蛋白的浓度。
试剂盒参数：
检测范围：0.5ng/ml -150ng/ml
灵敏度：最小可检测剂量小于等于0.2ng/ml
试剂盒组分: （保存温度4℃）
名 称 | BES0183K（48T） | BES0183K（96T） | 储存条件 |
预包被酶标板 | 8×6条 | 8×12条 | 未用完的酶标板密封干燥保存可于2-8℃储存至多1个月。 |
标准品（红色） | 1支×100μL | 2支×100μL | 每次测试按需配置标准品，剩余置于-20℃储存至多6个月。 |
100×生物素化抗体（粉色） | 1支×60μL | 1支×120μL | 每次测试按需配置抗体工作液，剩余置于-20℃储存至多6个月。 |
浓缩ABC复合物(稀释1：100)(绿色盖) (亲和素生物素过氧化物酶复合体) | 1支×60μL | 1支×120μL | 每次测试按需配置酶结合物工作液，剩余置于-20℃储存至多6个月。 |
20×浓缩稀释液（紫色） | 1支×15mL | 1支×30mL | 于2-8℃可保存至有效期末。 |
TMB显色底物) (棕色瓶) | 1支×5mL | 1支×10mL | |
终止液（黄色） | 1支×5mL | 1支×10mL | |
20×浓缩洗涤液（蓝色） | 1支×15mL | 1支×30mL | |
封板胶纸 | 2张 | 2张 | |
产品说明书 | 1份 | 1份 |
标本收集与试剂准备:
样品预处理：
下面列出的样品收集和储存条件旨在作为一般性指导。样品稳定性尚未评估。
细胞培养上清液：
在1000×g下离心15分钟去除颗粒，立即进行测定或等分装样品，并将样品储存在≤-20℃的温度下。避免重复冻融循环。（细胞培养上清液样品建议2倍稀释。例如：100μL样品+100μL的1×稀释液）
血清：
使用血清分离管，使样品在室温下凝结30分钟，然后在1000×g下离心15分钟。立即取出血清并进行测定或等分装样品，将样品储存在≤-20℃的温度下。避免重复冻融循环。（血清样品建议2倍稀释。例如：50μL样品+50μL的1×稀释液）
血浆：
使用EDTA或肝素作为抗凝剂收集血浆。收集后30分钟内，以1000×g离心15分钟。立即测定或等分装样品，并将样品储存在≤-20℃的温度下。避免重复冻融循环。（血浆样品建议2倍稀释。例如：50μL样品+50μL的1×稀释液）
注：柠檬酸盐抗凝剂血浆未经验证可用于本试验，使用时应自行验证可行性。溶血的样品不适合用于该测定。
组织匀浆：
用预冷的PBS(0.01M,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响检测结果），称
重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨或匀浆机研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5-10分钟，取上清检测。
细胞裂解液：
贴壁细胞用预冷PBS轻轻清洗，然后用胰蛋白酶消化，1000×g离心5分钟后收集细胞；悬浮细胞可直接离心收集。收集的细胞用预冷PBS清洗3次，每1×106个细胞中加入150-200μL的PBS重悬（推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂；若含量很低可适当减少PBS体积）并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃，1500×g离心10分钟，取上清检测。
1.其它样本类型：1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
2.洗涤液配置：用蒸馏水1:20稀释（例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的蒸馏水）
3.标准品配制：取8个1.5ml离心管，分别标注S1,S2,S3,S4,S5,S6，S7，blank，第一管S1(100ul)中加入标准品/样品稀释液900ul，第二至第八管中分别加入标准品/样品稀释液200ul，在第一管中加入标准品溶液（1600ng/ml ）100ul置于漩涡混合器上混匀后用加样器吸出200ul，移至第二管，如此反复作对倍稀释至S7，第八管为空白对照。配置好的标准曲线浓度为:160、、80、40、20、10、5、0 0ng/ml（标准品的用量及标准曲线范围也可根据自己需要配置）。
1. 2.生物素化抗体工作液配置:使用前20分钟，用生物素化抗体稀释液将100×生物素化抗体稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。
2. 3.SABC工作液配置:使用前20分钟，用SABC稀释液将100×SABC稀释成1×工作液，根据所需用量配置，当日使用，剩余弃之。
3. 4.如果您检测的样本中靶蛋白浓度高于标准品最高值，建议重新检测，请根据实际情况，适当倍数稀释(建议做预实验，以确定稀释倍数)。
试剂盒性能:
1、特异性:不与其它蛋白、细胞因子有交叉反应。
2、重复性:板内，板间变异系数均小于10%。
注意事项：
1. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测，每次检测都应做标准曲线。
2. 洗涤过程很关键，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高，从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象，37℃水浴使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
3. 检测时所有试剂都要恢复到室温，板条开封后剩余板条需封好，放回袋中1 个月内用完。
4. 试剂盒使用超敏TMB溶液，显色过深时会出现沉淀状，属正常现象，混匀即可，不影响结果判读。
5. 说明书以试剂盒内纸质版为准,本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断！